Xenopus卵のDNA複製におけるDNAひねり因子の機構に関する研究

非洲爪蟾卵DNA复制中DNA扭曲因子的机制研究

基本信息

批准号：
11143201
负责人：
室伏擴
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11143201/
关键词：
Xenopus卵 DNA複製 SSRP1 Cdc68 HMGタンパク質クロマチンヒストン FACT

项目摘要

DUFは、Xenopus卵抽出液から精製された因子で、二重鎖DNAに結合して、二重鎖に負のひねりを加えることによって、二重鎖を局部的に開く活性を持つ。抗-DUF抗体を用いてXenopus卵抽出液からDUFを除くと、卵抽出的のDNA複製活性が失われることから、DUFはDNA複製に必要な因子であることがわかった。また、cDNAクローニングの結果、DUFは、出芽酵母のCdc68pの類似体とSSRPl(HMGタンパク質の一種)とのヘテロニ両体であることがわかっている。Xenopus卵抽出液に除膜した精子頭部を加えると、DUFはDNA複製が起こる前に精子クロマチンに取り込まれることがわかった。さらに、卵抽出液中でファージDNAから形成されたクロマチンにもDUFが結合し、形成したクロマチン構造をゆるめる働きがあることがわかった(ヌクレアーゼ感受性試験の結果)。また、DUFはヒストンH2A、H2B、H3、H4と強い親和性を持っことがわかった。DUFはDNAのみならず、コアヒストンとも相互作用して、DNA複製に必要なゆるんだクロマチン構造を作る作用を持つと考えられる。現在、ヒトDUFの両サブユニットの発現を行い、DUFの再構成系を確立しつつある。再構成されたDUFを用いて、DUFとヌクレオソームとの相互作用を詳細に調べる予定である。Reinbergのグループによって発見されたFACTは、ヌクレオソーム構造を壊すことによってRNAポリメラーゼの進行を促進する働きを持つ因子であるが、最近の彼らの研究により、FACTがDUFと同じものであることがわかった。DUF/FACTは、クロマチンに作用することによって、DNA複製および転写を正に制御する機能を持つ重要な因子であると考えられる。

DUF是从爪蟾卵提取物中纯化的因素，其活性通过与双链DNA结合并在双链体中施加负扭转，从而在局部打开双链体。使用抗DUF抗体从异爪蟾鸡蛋提取物中取出的DUF导致卵被提取的DNA复制活性丧失，这表明DUF是DNA复制的必要因素。此外，cDNA克隆表明DUF既是发芽酵母和SSRPL（一种HMG蛋白）的Cdc68p类似物的杂音。将去除的精子头添加到爪蟾鸡蛋提取物中，发现在进行DNA复制之前，通过精子染色质吸收了DUF。此外，发现DUF与鸡蛋提取物中噬菌体DNA形成的染色质结合，从而引起松动形成的染色质结构的功能（核酸酶敏感性测试的结果）。还发现DUF与组蛋白H2A，H2B，H3和H4具有很强的亲和力。人们认为DUF不仅与DNA相互作用，而且与核心组蛋白相互作用，以产生DNA复制所需的松散染色质结构。目前，正在表达人类DUF的两个亚基，并建立了用于DUF的重建系统。重建的DUF将用于详细研究DUFS与核小体之间的相互作用。 Reinberg组发现的事实是一个因素，是通过破坏核小体结构来促进RNA聚合酶进展的因素，但他们最近的研究表明，事实与DUF相同。据信DUF/事实是一个重要因素，具有通过作用于染色质来积极调节DNA复制和转录的能力。