Xenopus卵のDNA複製におけるDNAひねり因子の機構に関する研究

非洲爪蟾卵DNA复制中DNA扭曲因子的机制研究

基本信息

批准号：
11143201
负责人：
室伏擴
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11143201/
关键词：
Xenopus卵 DNA複製 SSRP1 Cdc68 HMGタンパク質クロマチンヒストン FACT

项目摘要

DUFは、Xenopus卵抽出液から精製された因子で、二重鎖DNAに結合して、二重鎖に負のひねりを加えることによって、二重鎖を局部的に開く活性を持つ。抗-DUF抗体を用いてXenopus卵抽出液からDUFを除くと、卵抽出的のDNA複製活性が失われることから、DUFはDNA複製に必要な因子であることがわかった。また、cDNAクローニングの結果、DUFは、出芽酵母のCdc68pの類似体とSSRPl(HMGタンパク質の一種)とのヘテロニ両体であることがわかっている。Xenopus卵抽出液に除膜した精子頭部を加えると、DUFはDNA複製が起こる前に精子クロマチンに取り込まれることがわかった。さらに、卵抽出液中でファージDNAから形成されたクロマチンにもDUFが結合し、形成したクロマチン構造をゆるめる働きがあることがわかった(ヌクレアーゼ感受性試験の結果)。また、DUFはヒストンH2A、H2B、H3、H4と強い親和性を持っことがわかった。DUFはDNAのみならず、コアヒストンとも相互作用して、DNA複製に必要なゆるんだクロマチン構造を作る作用を持つと考えられる。現在、ヒトDUFの両サブユニットの発現を行い、DUFの再構成系を確立しつつある。再構成されたDUFを用いて、DUFとヌクレオソームとの相互作用を詳細に調べる予定である。Reinbergのグループによって発見されたFACTは、ヌクレオソーム構造を壊すことによってRNAポリメラーゼの進行を促進する働きを持つ因子であるが、最近の彼らの研究により、FACTがDUFと同じものであることがわかった。DUF/FACTは、クロマチンに作用することによって、DNA複製および転写を正に制御する機能を持つ重要な因子であると考えられる。

DUF 是从非洲爪蟾卵提取物中纯化出来的因子，具有与双链 DNA 结合并通过向双链体添加负扭曲来局部打开双链 DNA 的活性。当使用抗DUF抗体从爪蟾卵提取物中去除DUF时，卵提取物的DNA复制活性丧失，表明DUF是DNA复制的必要因子。此外，作为cDNA克隆的结果，发现DUF是酿酒酵母Cdc68p的类似物和SSRP1(一种HMG蛋白)的杂合子。当将膜提取的精子头添加到非洲爪蟾卵提取物中时，发现 DUF 在 DNA 复制发生之前就融入了精子染色质中。此外，还发现DUF还与鸡蛋提取物中的噬菌体DNA形成的染色质结合，具有使形成的染色质结构松弛的效果（核酸酶敏感性试验的结果）。此外，DUF 被发现对组蛋白 H2A、H2B、H3 和 H4 具有很强的亲和力。 DUF 被认为不仅与 DNA 相互作用，还与核心组蛋白相互作用，从而形成 DNA 复制所需的松散染色质结构。目前，我们正在表达人类DUF的两个亚基并建立DUF重建系统。我们计划使用重构的 DUF 来详细研究 DUF 和核小体之间的相互作用。 Reinberg团队发现的FACT是一种通过破坏核小体结构来促进RNA聚合酶进展的因子，他们最近的研究表明FACT与DUF相同。 DUF/FACT被认为是通过作用于染色质来正向控制DNA复制和转录的重要因子。