ヒト脳δ型オピオイド受容体サブタイプのcDNAクローニングとリガンド結合部位解析

人脑δ阿片受体亚型的cDNA克隆和配体结合位点分析

基本信息

批准号：
07680653
负责人：
下東康幸
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

オピオイド受容体δ型にはサブタイプがあり、受容体間クロストークによりμ型をアロステリックに制御すると言われている。我々は最近、立体制約アミノ酸、(2R,3S)-E-シクロプロピルフェニルアラニン(∇Phe)を含むエンケファリン誘導体CP-OHがこのδ型サブタイプを識別・認識できる化合物であることを示した。本研究の目的は、このサブタイプをヒト脳cDNAライブラリーからスクリーニングして、一次構造を解析し、特異リガンドCP-OHの結合部位を解析することである。まず、ヒト脳δ、μ、κ型オピオイド受容体の塩基配列の比較からδ型にのみ存在する配列部分をプライマーとして設計、合成し、ヒト脳cDNAライブラリーを鋳型にして、PCRを実施した。その結果、δ型受容体のC端側約50%の大きさに相当するクローンを得た。このクローンはδ型と約60%の相同性を持ち、δ型とは明らかに異なる受容体をコードしていると判断された。この受容体のN端側の解析を試みたが、用いたヒト脳cDNAライブラリーからの解析は困難であった。核酸データバンクを検索したところopioid 'orphan' receptorとして登録されているものに類似していた。このため、この受容体の3'側で特異的なプライマーを設計、合成し、ヒト脳のmRNAより逆転写PCRを実施したところ、受容体のN端側を含む447塩基のクローンを得ることができた。これにより、全長約3.0kbの塩基配列を決定した。ところが、このものはごく最近になって報告された疼痛伝達受容体OLR1と同一のものであることが判明した。現在、この受容体がCP-OHの特異的な受容体かを検討すべく、受容体結合試験等を準備している。

δ型阿片受体有亚型，μ型据说是通过受体间串扰进行变构控制的。我们最近证明，脑啡肽衍生物CP-OH含有空间受限氨基酸(2R,3S)-E-环丙基苯丙氨酸(∇Phe)，是一种可以识别和识别这种δ亚型的化合物。本研究的目的是从人脑cDNA文库中筛选该亚型，分析其一级结构，并分析特异性配体CP-OH的结合位点。首先，通过比较人脑δ型、μ型、κ型阿片受体的碱基序列，设计并合成仅存在于δ型的序列部分作为引物，并使用人脑cDNA进行PCR库作为模板。结果，获得了相当于δ型受体C末端侧大小的约50％的克隆。该克隆与δ型有约60%的同源性，并被确定编码与δ型明显不同的受体。我们试图分析该受体的 N 末端侧，但使用所用的人脑 cDNA 文库进行分析很困难。对核酸数据库的搜索显示，它与注册为阿片类“孤儿”受体的受体相似。因此，当我们设计并合成该受体3'侧的特异性引物并使用人脑mRNA进行逆转录PCR时，我们能够获得包含受体I的N端侧的447个碱基的克隆。去做它。结果，确定了大约3.0kb的全长碱基序列。然而，人们发现这种受体与最近才被报道的疼痛传递受体OLR1相同。我们目前正在准备受体结合测试，以检查该受体是否是CP-OH的特异性受体。