N端オクタペプチドリピート多重体化によるプリオン感染型-正常型の特異的分子認識

N端八肽重复多重识别朊病毒感染型和正常型的特异性分子识别

基本信息

批准号：
17657038
负责人：
下東康幸
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17657038/
关键词：
生体分子蛋白質分子認識感染症

项目摘要

前年度は、アミノ酸残基23〜95位、アミノ酸残基23〜100位、アミノ酸残基23〜105位の3種について、タンパク質を発現・精製し、これらがポリマー化することをMALDI-TOF質量分析で明らかにした。そこで、本年度はこうしたタンパク質がポリマー化する要因を解明するため、変異タンパク質の発現プラスミドを構築し、発現に成就した。現在、精製物について解析を実施している。1 オクタペプチド構造のポリマー化の解析のための変異タンパク質発現プラスミドの構築(1)オクタペプチドのリピート数増減発現プラスミドの構築オクタペプチドのリピート数の多さがプリオン病発症年齢の早さ、感染の起きやすさに関連しているとの報告がある。これらがTrp/Hisのπ/πスタッキング相互作用による分子間多重体化の起こり易さ、安定度に相関している可能性があり、このため、リピート数を系統的に違えたプリオンタンパク質PrP(23-100)誘導体の発現プラスミド調製法の開発に取組んだ。リピート数1〜13までの発現プラスミドを作製し、発現・精製を行った。リピートの繰り返し13個のタンパク質は、発現するものの、精製過程で沈殿・凝集が起きやすくなることが判明した。他のものにつて現在、相互作用を解析中である。現在までに分析条件の設定に成就した。(2)オクタペプチドのTrp→Ala変異プラスミドの構築Trp/Hisのπ/πスタッキング相互作用による分子閻多重体化の起こり易さ、安定度に相関しているかを検討するために、リピート中のTrpをAlaに変異させた発現プラスミドを構築した。Trp→Ala変異体については、リピート数も1から5まで変化させたプラスミドの構築に成就した。これらは野生型の揚合と同じ方法で発現・精製が可能であった。現在、相互作用を解析中である。2 オクタペプチドリピート構造の感染性異常型プリオン発現抑制の検討恒常的に感染性の異常型プリオンを発現する細胞株が樹立されている。動物衛生研究所より、マウス神経芽細胞のスクレイjピー持続感染株N2a58-Scの分与を受け、これに対する発現タンパク質の影響をみる試験系の構築を行い、これに成就した。

在上一年，三种类型的氨基酸残基，23至100个氨基酸残基，23至105个氨基酸残基，是MALDI-TOF质量的MALDI-TOF质量。因此，在这个财政年度中，建立了突变蛋白的表达质粒，以阐明该蛋白聚合的因素，并实现了表达。目前，我们正在分析纯化的项目。 1。分析八肽结构的聚合（1）八肽重复的延伸并减少质粒的互相蛋白表达质粒。这些可能与由于Trp/His的π/π堆叠相互作用而引起的分子之间的易于多样化，因此，衍生物的前蛋白蛋白PRP（23-100）表达衍生物在质粒发展方面发育。准备方法。产生了从1到13个重复数量的重复量的表达质粒，并进行了表达和纯化。发现表达了重复的13种蛋白质，但是在纯化过程中会发生降水和聚集的可能性更大。我们目前正在分析其他事物的互动。迄今为止，它已经在设定分析条件下实现了。（2）八肽的TRP→ALA突变质粒构造π/π堆积的π/π堆积的π/π堆积的π/π堆积，以检查我们建立了一种转化的质粒，以检查分子元素化的易感性。 TRP到ALA。关于TRP→ALA突变体，重复次数已从1变为5。这些是可能的，并以与野外打火机相同的方式进行纯化。目前分析互动。 2。检查八肽泥炭结构的感染性prion表达抑制，有一个恒定的细胞库存表达异常感染 - 型prion。动物卫生研究所获得了小鼠神经芽中SCRAY J-PEE可持续感染感染的分布，并建立了测试系统以查看表达蛋白的影响，并得到满足。