LeuーエンケファリンとMetーエンケファリンの機能は異なる

亮氨酸脑啡肽和甲硫氨酸脑啡肽的功能不同。

基本信息

批准号：
03808018
负责人：
下東康幸
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

LeuーおよびMetーエンケファリンは、鎮痛を司る神経ペプチドとしてきわめて重要な生理的機能をもつ。両エンケファリンは同一の前駆体タンパク質中にコ-ドされ、共にδ型オピオイド受容体を介して鎮痛作用を発現すると言われている。しかし、これら2種のペプチドの機能が同じであるかについては未解決の問題である。本研究では、高度に立体制約されたアミノ酸2,3ーシクロプロピルフェニルアラニン(VPhe)を含む[DーAla^2,VPhe^4,Leu^5]エンケファリン(CPーEnK)が、ラット脳の新規なδ型受容体に特異的に結合することに着目し、「両エンケファリンが異なるδ型受容体のリガンドであり、機能が異なる」ことを立証するため、放射標識体を調製し、各種受容体応答解析のための基礎検討を実施した。放射標識の対照リガンドとして最良のCPーEnKを選択するため、今回、こはまで合成が困難であったZ型(2R,3R)VPheおよび(2S,3S)VPheを含むCPーEnKの化学合成を試み、立体化学保持の化合物の合成に成功した。これらCPーEnKと既に合成済みのE型CPーEnK、合計4種のエンケファリンについて、ラット脳を用いて受容体結合試験を実施した。その結果、従来より区別されているδ型とM型受容体に対して調べたところ、Z型(2R,3R)体がδ型にIC_<50>値1.74nMと最も高い親和性を示した。しかし、M型へも親和性が高く(6.53nM)、従って選択性が約4倍と低く、E型(2R,3S)体の100倍を陵駕できなかった。Z型(2S,3S)体は非選択性、E型(2S,3R)体はほとんど不活性であった。この結果、放射標識にはE型(2R,3S)体が最良であることが判明した。放射標識体は、市販の ^3HーTyrとC端側VPhe含有ペプチドを酵素的に結合させることにし、ペプチドの化学合成とHPLCによ分離・精製の条件検討を実施した。その結果、 ^3HーTyr、前駆体ペプチドおよびエンケファリンの良好な分離が達成された。今後さらに、受容体の識別,アロステリック効果の解析を実施する。

LEU -MET -ENKEFARIN具有控制止痛药的神经肽非常重要的生理功能。据说两种依氏蛋白都涂有相同的前体蛋白，它们都通过δ型阿片类药物受体具有镇痛作用。但是，这两个肽的功能是否相同是一个尚未解决的问题。在这项研究中，[d -ala^2，vphe^4，leu^5] enkifarin（cp -enk），包括高三三维氨基酸2,3 -3-三 - 近三苯基苯基苯基丙氨酸（VPHE），是大鼠新的大脑重点是与δ型受体结合，辐射符号是为了证明这两个enkifarin是不同的δ型受体的配体，并且具有不同的响应分析。为了选择最佳的CP -ENK作为辐射标志的对比配体，这次是Z型（2R，3R）VPHE和（2S，3S）VPHE，这是很难合成的，这次是化学合成成功合成立体化合物。这些已经合成的CP -ENK和E -type CP -ENK使用大鼠脑进行了四个enkifarins的受体战斗试验。结果，当检查与过去区分的δ类型和M型受体时，Z型（2R，3R）体显示了Δ<50> 1.74 nm的最高亲和力。但是，M型具有高亲和力（6.53 nm），因此选择降低了大约四倍，无法确定E -type（2R，3S）身体的100倍。 Z型（2s，3s）身体是非选择性的，E -type（2s，3R）身体几乎没有活性。结果，发现E -Type（2R，3S）体是辐射标志中最好的。辐射符号是将C -End侧含有VPHE的肽和VPHE肽组合为酶，并进行肽化学合成和HPLC。结果，实现了 ^3Hーtyr的良好分离，前体的肽和含糊不清。将来，我们将实施对受体的识别并分析酸味效应。