新しい接着分子としてのBGPIの臨床的意義と機能解析

BGPI作为新型粘附分子的临床意义及功能分析

基本信息

批准号：
04807045
负责人：
日野田裕治
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至 1993
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04807045/
关键词：
Biliary glycoprotein CEAファミリー肝細胞癌モノクローナル抗体 BGPI 胆汁肝 CEA BGPI mRNA

项目摘要

Biliary glycoprotein(BGP)の肝疾患における意義とその機能を明らかにする目的で、本年度は、BGPに特異性の高いモノクローナル抗体を作製した。BGP cDNAをH-rasでトランスフォームしたNIH3T3細胞に移入してトランスフェクトーマを作製し、これを免疫原としてモノクローナル抗体T135を確立した。T135は血清および胆汁中のCEAとは反応せず、BGPに高い特異性を有すると考えられた。免疫組織学的検討では、正常肝組織においては毛細胆管が強く染色された。慢性肝炎でも同様のパターンであったが、脂肪変性の強い部分は陰性であった。肝細胞癌は、これまで30例について検討したが、分化度の高い例では細胞間や偽胆管内腔が陽性であったが、低分化型ではほとんど反応を認めなかった。従って、BGPは肝細胞の分化形質の一つである可能性があり、その発現低下と癌の悪性度との関連を更に検討中である。次に、T135とポリクローナル抗CEA抗体を用いたELISAを確立し、胆汁および血清中のBGP測定が可能となった。ポリクローナル抗CEA抗体はBGPと強く反応するため、これを一次抗体とし、特異性の高いT135を二次抗体とした。各検体について別にCEAレベルを測定し、CEA値が正常のものについて測定を行うことによりその影響を除外した。さらに、BGPトランスフェクトーマの細胞凝集に及ぼすT135の影響を観察した。NIH3T3は元々強い凝集活性を有するため明らかな影響を認めなかったが、ヒト肝癌細胞株CHC4ではBGPによると思われる凝集を抑制した。現在T135のエピトープについてマッピングを行っている。

为了阐明胆汁糖蛋白（BGP）在肝脏疾病中的意义和功能，今年我们制备了对BGP具有高特异性的单克隆抗体。将BGP cDNA转入H-ras转化的NIH3T3细胞中，产生转染瘤，并以此作为免疫原建立单克隆抗体T135。 T135不与血清或胆汁中的CEA发生反应，被认为对BGP具有高度特异性。在免疫组织学检查中，正常肝组织中的胆小管被强烈染色。在慢性肝炎中也观察到了类似的模式，但在严重脂肪变性的区域结果呈阴性。到目前为止，我们已经检查了30例肝细胞癌，在高分化病例中，细胞间隙和假胆管腔呈阳性，但在低分化病例中，几乎没有观察到反应。因此，BGP可能是肝细胞的分化特征之一，目前我们正在研究BGP表达下降与癌症恶性程度的关系。接下来，我们使用 T135 和多克隆抗 CEA 抗体建立了 ELISA，从而可以测量胆汁和血清中的 BGP。由于多克隆抗CEA抗体与BGP反应强烈，因此将其用作一抗，并使用高度特异性的T135作为二抗。分别测量每个样本的CEA水平，并通过测量CEA值正常的样本来排除其影响。此外，我们观察了T135对BGP转染瘤细胞聚集的影响。由于NIH3T3原本具有很强的聚集活性，因此没有观察到明显的效果，但在人肝癌细胞系CHC4中，它抑制了被认为是由BGP引起的聚集。我们目前正在绘制 T135 的表位。