大腸上皮細胞の分化と癌化におけるBGP(CD66a)の役割の解析

BGP(CD66a)在结肠上皮细胞分化和癌变中的作用分析

• 批准号: 07670181
• 负责人: 黒木 求
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Fukuoka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07670181/
• 关键词: BGP; CD66a; 細胞分化; 癌抑制遺伝子; 大腸上皮細胞; CEAファミリー

1. バキュロウイルス/カイコ発現系を用いて調製したBGPリコンビナントタンパクを抗原として,BGPに特異的なモノクローナル抗体の作製を試みた結果,CEAやNCAと交差反応する抗体は得られたが,BGPとのみ反応する抗体クローンは得られなかった.現在引き続きBGPに特異的なアミノ酸配列をもつペプタイドを免疫原としてモノクローナル抗体の作製を行っている.2. 大腸癌の摘出標本よりRNAを抽出し,BGP特異的なプライマーを用いたRT-PCRを行いBGP mRNAの発現を周辺正常粘膜と比較した結果,癌組織での低下が認められた.3. in vitroでグルコース非存在下に培養することにより正常大腸上皮細胞に似た形質を獲得するヒト大腸癌由来細胞株HT-29の培養前後のBGPおよびCEAのmRNAレベルでの発現の変化を,RT-PCRにより調べたが,どちらも有意な差は認められなかった.4. BGPのcDNAを組み込んだpdKCR-neo vectorをHT-29細胞にトランスフェクトし,geneticin耐性クローンを得た.さらに異なる特異性を有するCD66抗体の組み合わせによるflow cytometryによりBGP高発現クローンを選択した.得られたクローンのBGPおよびCEAの発現をRT-PCRにより検討したがやはり有意な差は認められなかった.5. 以上のように当初の目的はまだ達成されていないが,今後定量性にやや問題のあるRT-PCRの代わりにRNA protection assayを,またBGPに特異的なモノクローナル抗体を用いて解析を行う予定である.

1。使用真空病毒/蚕的BGP重组蛋白是一种抗原，并且由于试图产生特定于BGP的单克隆抗体，因此获得了对CEA和NCA的抗体，但获得了BGP的抗体。 RT-PCR膜检查了BGP和CEA mRNA水平的变化，在获得类似于大肠上皮细胞的人类结直肠癌衍生的细胞库存培养物，但两者都是显着的差异。将纳入BGP的cDNA的NEO载体转染到HT-29细胞中，该细胞融合了BGP的cDNA，并选择了遗传性的克隆。 RT-PCR，但没有显着差异。具有特殊单克隆抗体的BGP。