CEA関連抗原遺伝子の分子生物学的解析および産物の機能

CEA相关抗原基因及产物功能的分子生物学分析

基本信息

批准号：
01015093
负责人：
日野田裕治
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、CEA関連抗原であるnonspecific crossreactin antigen(NCA)とbiliary glycoprotein I(BGP I)の分子生物学的解析を通じて、これら分子の機能を明らかにする点にある。本年度の研究成果として以下の点が挙げられる。i)BGP I cDNAの解析から、BGP Iには少なくとも4つのisoformが存在するがノザンブロット法による種々の細胞株や癌組織においては、3.9kbの単一のmessageのみ検出される。ii)CEA NCAの発現していない肝細胞癌においてBGP I mRNAが高率に発現することを見い出し、従来肝細胞癌に検出されていたCEA様抗原の本体がBGP Iであることを強く示唆した。iii)NCA mRNAの発現が、大腸癌において非癌部組織より明らかに強いことをin situ hybridization法を用いて明らかにし、NCAの腫瘍マーカーとしての有用性を示唆した。iv)NCA cDNAを発現ベクターに組み込み、CHOK1細胞を用いてトランスフェクトーマを作製した。v)NCAおよびBGP Iの合成ペプチドに対するモノクローナル抗体を作製し、免疫原のペプチドに強く反応するクローンを確立した。vi)BGP I cDNAの5端側をプローブとしてgenomicライブラリーをスクリーニングし、数個の陽性クローンを得た。今後はこれらの材料を用いて以下の点につき明らかにする。i)細胞質ドメインにリン酸化部位の存在が示唆されるBGP Iのリン酸化を検討する。ii)すでに報告されているCEAファミリーの接着分子としての可能性を抗ペプチドモノクローナル抗体やトランスフェクトーマを用いてNCAやBGP Iについて検討する。iii)genomicライブラリーより得たBGP Iをcodeすると思われるクローンを解析し、本遺伝子の5上流領域の配列を決定する。iv)NCAの腫瘍マーカーとしての役割をさらに明確にする。

本研究的目的是通过分子生物学分析阐明CEA相关抗原、非特异性交叉反应素抗原（NCA）和胆汁糖蛋白I（BGP I）的功能。今年的研究成果包括以下几点。 i) BGP I cDNA 分析显示至少有四种 BGP I 亚型，但通过 Northern blotting 在各种细胞系和癌组织中仅检测到 3.9 kb 的单一信息。 ii)我们发现BGP I mRNA在不表达CEA NCA的肝细胞癌中高表达，强烈表明BGP I是先前在肝细胞癌中检测到的CEA样抗原的主体。 iii) 使用原位杂交，我们证明结直肠癌中的 NCA mRNA 表达明显强于非癌组织，这表明 NCA 作为肿瘤标志物的有用性。 iv) 将 NCA cDNA 插入表达载体，并使用 CHOK1 细胞产生转染瘤。 v) 我们生成了针对 NCA 和 BGP I 合成肽的单克隆抗体，并建立了与免疫原性肽强烈反应的克隆。 vi)以BGP I cDNA 5-末端为探针筛选基因组文库，获得数个阳性克隆。今后，我们将利用这些材料来阐明以下几点。 i) 检查 BGP I 的磷酸化，这表明细胞质结构域中存在磷酸化位点。 ii) 我们将使用抗肽单克隆抗体和转染瘤来检查NCA和BGP I作为CEA家族粘附分子的潜力，这已被报道。 iii)分析从基因组文库获得的被认为编码BGP I的克隆并确定该基因的5个上游区域的序列。 iv) 进一步阐明NCA作为肿瘤标志物的作用。