インプリンティング遺伝子のゲノムワイドな同定法の開発と、小児腫瘍の病態解明

开发印迹基因的全基因组鉴定方法并阐明儿科肿瘤的病理学

基本信息

批准号：
19659274
负责人：
林泰秀
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Gunma Institute of Public Health and Environmental Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659274/
关键词：
遺伝学遺伝子ゲノム癌マイクロアレイ

项目摘要

小児腫瘍において、種々の遺伝子がuniparental disomy(UPD)やその他のメカニズムによりインプリンティングが障害されていると考えられ、各腫瘍にはheterogeneityが存在することが予測され、ある腫瘍では別の腫瘍で障害されるインプリンティングは保存されていることが予測される。これらのことにより小児腫瘍では癌遺伝子が活性化されたり、メチル化などにより癌抑制遺伝子が不活化されることによる発癌メカニズムが考えられる。今年度は神経芽腫で検討した。新鮮神経芽腫215例と24細胞株において、100万SNPプローブを搭載したGeneChip1Mアレイを用いた手法によりUPDの網羅的な探索を行い、共通して認められるUPD領域を網羅的に探索した。Affymetrix社のGene Chipアレイによる神経芽腫の解析では、コピー数の増加または増幅は2番染色体のMYCN領域より少し中心体よりの領域でみられ、この領域にALK遺伝子が同定された。ALK遺伝子の変異の解析では変異は新鮮腫瘍215例中13例(6.1%)、細胞株24株中8株(33%)でみられた。変異がみられた新鮮腫瘍13例中12例が病期3〜4の進展例であった。変異キナーゼは自己リン酸されており、変異のないキナーゼに比べて活性が上昇していた。また変異体を導入したNIH3T3線維芽細胞は形質転換し、ソフトアガールでコロニー形成がみられ、ヌードマウスでも腫瘍を形成した。siRNAによってALKをdown regulationすると神経芽腫の増殖が抑制された(Nature 2008)。今回のALK遺伝子同定の結果は進行神経芽腫の発生機序の解明に貢献し、ALK阻害薬は治療に役立つ可能性が示唆された。

人们认为，各种基因因单亲疾病（UPD）和其他机制而受到损害，并且预测每个肿瘤中存在异质石，并且一个肿瘤被其他肿瘤无序。在这些情况下，癌变的机制是由小儿肿瘤中癌基因的激活引起的，并且由于甲基化而导致癌症抑制基因失活。今年，我们认为神经发芽。在215和24个新鲜神经发芽的库存中，使用配备100万个SNP探针的Genechip Array进行了全面搜索UPD，并探索了公认的UPD区域。根据Affymetrix的基因芯片阵列对神经系统发芽的分析，比第二染色体的MYCN区域略微发现了副本的数量增加或放大，并且在该区域鉴定了ALK基因。根据对ALK基因突变的分析，在215个新鲜肿瘤中有13个（6.1％）和24个细胞份额中的8个（33％）发现了这种变异。突变的13个新鲜肿瘤中有十二个是患病时期的3至4个。突变激酶是自磷酸盐，与突变激酶相比，活性升高。引入变体的NIH3T3成纤维细胞已在特征中转化，在软性agal中形成菌落，并在裸鼠中形成肿瘤。通过siRNA对ALK的下降抑制了神经发芽的生长（自然2008）。 ALK基因鉴定的结果有助于阐明发展神经性的机制，这表明ALK抑制剂可能对治疗有用。