小児悪性腫瘍における癌抑制遺伝子の探索と単離

小儿恶性肿瘤抑癌基因的寻找与分离

基本信息

批准号：
08283102
负责人：
林泰秀
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度は、神経芽腫では81例の腫瘍と正常細胞を用い、各染色体上の多型プローブを用いてloss of heterozygosity(LOH)の検討を行った。LOHは1pでは25%、、2qでは32%、9pでは40%、11qでは25%、14qでは32%、18qでは40%に認められた。9番の欠失部位の11個のマーカーによる検討では、9pではD9S162とIFNAの間に、9qではD9S152とD9S158の間が高頻度のLOHがみられ、この領域に癌抑制遺伝子が存在すると推定された。この領域に存在するp16遺伝子のSouthern法の検討では、homozygous deletion(HD)はみられなかった。PCR-SSCP法の検討では、80例中1例にcodon52でmissense mutationがみられた。さらにNBの細胞株を用いてNorthenとWestern法により発現を検討したところ、19株中12株で発現の消失がみられた。EcoRIとSmaIを用いて検討したところ、12株中5株にmethylationがみられることが判明した。18qでは大腸癌から癌抑制遺伝子として単離されたDCC遺伝子を原因遺伝子の候補として検討を行った。RT-PCR法による検討では、細胞株25株中12株(48%)、新鮮腫瘍32例中14例(44%)に発現の消失や減弱がみられた。25組のプライマーを作成し、PCR-SSCP法を用いて変異の検討を行い、codon176とcodon1105のmissense変異をみいだしたが、nonsense mutationはみられなかった。白血病での検討では、HDはT-ALLで56例中26例(46%)、B前駆型ALLで58例中22例(38%)にみられ、それぞれにnonsense mutationが3例と2例に同定され、p16遺伝子がALLの9p21欠損の原因遺伝子であることが明らかになった。また11q23に座位するMLL遺伝子を用いてt(5;11)、t(X;11)、t(11;16)、t(11;12)、t(11;15)、より3つの新しい遺伝子の単離に成功した。現在これらの遺伝子の性状の検討、キメラcDNAによる機能解析を行っている。

今年，使用81个肿瘤和正常细胞进行神经毛学检查了杂合性（LOH）的丧失，使用每个染色体上的多物探针。 1p的LOH为25％，2Q的LOH为32％，9p的40％，11Q的25％，14Q的32％，18Q的40％。根据第九缺失位点的11个标记，估计9P在D9S162和IFNA之间具有高频率，而D9S152和D9S158之间的LOH频率为9Q，并且该区域中有癌症抑制基因。在该区域的p16基因的研究中发现了纯合缺失（HD）。根据PCR-SSCP方法，在CODON52中的80例病例之一中发现了错义突变。此外，当使用NB细胞通过Northen和Western方法检查表达时，19股中有12个消失了。使用ECORI和SMAI的检查表明，12股中有5股甲基化。在18q中，已将DCC基因被分离为结直肠癌的癌症基因，被检查为病因基因的候选者。根据RT-PCR方法，在25个细胞股份中有12个（48％）和32个新鲜肿瘤中的14个（44％）正在消失和弱化。我们创建了25套底漆，使用PCR-SSCP方法检查了突变，并发现了Codon176和Codon1105的错义突变，但找不到胡说八道突变。在白血病的情况下，在26例T-ALL中发现了HD（46％），在B-谨慎的58例中，有22例，而3例和2例无义叛变。很明显，p16基因是所有9p21缺陷的致病基因。此外，使用MLL基因坐着，T（5; 11），t（x; 11），t（11; 16），t（11; 12），t（11; 15），t（11; 15）到11q23。目前，我们正在研究这些基因的特性，并通过嵌合cDNA进行功能分析。