小児悪性腫瘍における癌抑制遺伝子の探索と単離

小儿恶性肿瘤抑癌基因的寻找与分离

基本信息

批准号：
08283102
负责人：
林泰秀
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度は、神経芽腫では81例の腫瘍と正常細胞を用い、各染色体上の多型プローブを用いてloss of heterozygosity(LOH)の検討を行った。LOHは1pでは25%、、2qでは32%、9pでは40%、11qでは25%、14qでは32%、18qでは40%に認められた。9番の欠失部位の11個のマーカーによる検討では、9pではD9S162とIFNAの間に、9qではD9S152とD9S158の間が高頻度のLOHがみられ、この領域に癌抑制遺伝子が存在すると推定された。この領域に存在するp16遺伝子のSouthern法の検討では、homozygous deletion(HD)はみられなかった。PCR-SSCP法の検討では、80例中1例にcodon52でmissense mutationがみられた。さらにNBの細胞株を用いてNorthenとWestern法により発現を検討したところ、19株中12株で発現の消失がみられた。EcoRIとSmaIを用いて検討したところ、12株中5株にmethylationがみられることが判明した。18qでは大腸癌から癌抑制遺伝子として単離されたDCC遺伝子を原因遺伝子の候補として検討を行った。RT-PCR法による検討では、細胞株25株中12株(48%)、新鮮腫瘍32例中14例(44%)に発現の消失や減弱がみられた。25組のプライマーを作成し、PCR-SSCP法を用いて変異の検討を行い、codon176とcodon1105のmissense変異をみいだしたが、nonsense mutationはみられなかった。白血病での検討では、HDはT-ALLで56例中26例(46%)、B前駆型ALLで58例中22例(38%)にみられ、それぞれにnonsense mutationが3例と2例に同定され、p16遺伝子がALLの9p21欠損の原因遺伝子であることが明らかになった。また11q23に座位するMLL遺伝子を用いてt(5;11)、t(X;11)、t(11;16)、t(11;12)、t(11;15)、より3つの新しい遺伝子の単離に成功した。現在これらの遺伝子の性状の検討、キメラcDNAによる機能解析を行っている。

今年，使用81个肿瘤和正常细胞用于神经母细胞瘤，每个染色体上的多态性探针用于研究杂合性丧失（LOH）。发现LOH为1p的LOH为25％，2Q的32％，9p的40％，11Q的25％，14q的32％，18Q的40％。在第9号缺失位点有11个标记的研究中，在9p中发现了D9S162和IFNA之间的高频LOH，在9Q中发现了D9S152和D9S158之间，并且估计在该地区存在肿瘤抑制基因。在该区域中存在的p16基因的南部方法的研究中，未观察到纯合缺失（HD）。在PCR-SSCP方法中，有80例CODON52经历了错义突变。此外，使用北部和西方方法使用NB细胞系检查表达，其中12个菌株显示出表达丧失。当使用ECORI和SMAI估计时，发现在12种菌株中有5个观察到甲基化。在18q中，研究了从结肠癌中分离为肿瘤基因的DCC基因，被研究为候选病因基因。在RT-PCR研究中，25个细胞系中的12只（48％）和32个新鲜肿瘤中的14个（44％）显示出表达的损失或衰减。制备了25组引物，并使用PCR-SSCP方法检查了突变，并且发现CODON176和CODON1105中的错义突变，但未观察到胡说八道突变。在白血病研究中，在56例（46％）中有26例T-All观察到HD，而B-致病剂的58例（38％）中有22例（38％）在3例和2例中发现了无义突变，这表明P16基因是所有p16基因是全部9p21的致病基因。此外，使用MLL基因在11q23：t（5; 11），t（x; 11），t（11; 16），t（11; 12; 12）和t（11; 15）中成功分离了三个新基因。当前，正在检查这些基因的特性，并使用嵌合cDNA进行功能分析。