神経幹細胞標識トランスジェニックマウスを用いた神経因性疼痛発症機構に関する研究

利用神经干细胞标记转基因小鼠研究神经病理性疼痛发病机制

基本信息

批准号：
16659088
负责人：
伊藤誠二
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

神経因性疼痛発症維持過程において、神経幹細胞による神経再生が関与するかどうかを明らかにするために、神経幹細胞のマーカーであるnestinのプロモーターの下流にGFPを組み込んだトランスジェニックマウス(pNestin-GFP Tg)マウスを用いて実験を行った。正常マウスで腰髄と後根神経節(DRG)におけるGFPの発現パターンを胎児期から成体までの発達段階で詳細に検討した結果、胎児では脊髄の中心管が強く染色され、生後日が進むにつれて蛍光強度はさがるものの、中心管周囲の細胞がGFP陽性となった。腰髄の切片でも中心管の周囲が強く染まった。DRGでは、一次求心性線維を出している神経細胞には発現せず、神経細胞を取り囲むpericytesに強く発現していた。坐骨神経結紮モデルを作製した。このモデルマウスでは、1週間後に熱や機械的刺激に対して痛覚過敏反応を示す。手術後2、3日目に後角の両側とも全体にGFP陽性細胞が増加し、炎症が消褪し、神経因性疼痛が確立する7日目では同時に結紮した肢側の脊髄後角にGFP陽性細胞が有意に増加した。このGFP陽性細胞は、神経細胞のマーカーであるMAP-2やPGP9.5、アストログリアのマーカーのGFAPいずれに対しても共染されなかった。神経型一酸化窒素合成酵素同様nestin陽性細胞は主として中心管付近に存在した。疼痛の感覚細胞はDRGにあり、NGFやBDNFが神経細胞の生存に必要なことがよく知られている。DRGの中にSCF/c-kitチロシンキナーゼ受容体を発現し、その生存に関与する細胞に着目し、c-kit受容体が痛覚伝達に重要な脊髄後角の浅層にCGRPといっしょに発現していること、neonatal capsaisin処置でその発現と疼痛が消滅することからc-kit系が疼痛に関与すること、さらに神経因性疼痛モデルで神経損傷側よりむしろ反対側の脊髄表層にタンパクとmRNAの発現が増大することから、SCF/c-kit系は疼痛の発症だけでなく神経再生にも関与する可能性を示した。

转基因小鼠（Pnestin-GFP TG（PNESTIN-GFP TG），该小鼠在Nestin启动子（Nestin House）下结合GFP，以阐明神经干细胞的神经再生是否参与神经因果疼痛的维持过程。鼠标。由于检查了正常小鼠中GFP的外观模式和后神节点（DRG）在胎儿时期到成人的发育阶段，因此胎儿是强烈染色的。尽管已经暴露了荧光强度，但中心管周围的细胞已成为GFP阳性。即使在纸浆线切割中，中央管道周围的区域也被强烈染色。在DRG中，它没有在产生原发性离心纤维的神经细胞中表达，而是在神经细胞周围的周细胞中强烈表达。创建了一个坐骨神经裁缝模型。一周后，该模型小鼠对热和机械刺激有痛苦的反应。在手术的第二天和第三天，后角两侧两侧的GFP阳性细胞增加，炎症消失了，在建立神经植物疼痛的第七天，GFP同时在膜的后角上同时结扎肢体的肢体呈明显增加。 GFP阳性细胞未与神经细胞标记物MAP-2，PGP9.5和Astroglia标记GFAP共同染色。巢蛋白阳性细胞以及神经型氧化氧化物合成酶主要在中心管附近。众所周知，疼痛感觉细胞在DRG中，而NGF和BDNF对于神经细胞是必需的。 SCF/C-KIT酪氨酸激酶受体在DRG中表达，重点是与其生存有关的细胞，并且C-KIT受体在浅层脊髓中表达，这对于疼痛的传播很重要。在新生儿辣椒素治疗中的表达和疼痛消失，C-KIT系统参与疼痛，而神经粘合疼痛模型不是神经损伤的一侧，而不是神经损伤侧，而不是神经损伤侧，在神经损伤的另一侧随着表达的增加，SCF/C-KIT系统不仅显示出疼痛的发作，而且还可能在神经再生中。