リンパ球の発生分化における組み換え活性化遺伝子の転写調節機構の解明

阐明淋巴细胞发育和分化过程中重组激活基因的转录调控机制

基本信息

批准号：
08839007
负责人：
村口篤
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Toyama Medical and Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)RAG遺伝子の一部をプローブとして、ヒトRAG1ゲノム遺伝子を単離し、その構造およびプロモーター部位の解析を行った。RAG1の基本的転写を調節する塩基配列はRAG遺伝子第1エクソンの上流約100bpに位置するCCAATであった(Kurioka et al.Molecular lmmunol.1996)。(2)RAG1遺伝子の近傍のクロマチン構造をDNAase超感受性(HS)によって決定した。その結果、RAG1遺伝子の発現と相関するHS部位が数個あることが明らかとなった。これらのHS部位(プロモーター部位)をRAG1遺伝子を発現していない細胞に導入するとプロモーター活性があることが確認された。このことより、RAG1遺伝子の特異的発現はプロモーター領域のクロマチン構造の変化に依存することが明らかとなった(Kitagawa et al,Blood,1996)。(3)ヒトのリンパ球前駆細胞株を骨髄由来ストローマ細胞とサイトカインで刺激するとRAG遺伝子の発現が誘導されることを示した。また、その発現にはストローマ細胞上の分子とリンパ球前駆細胞の直接接触が必須であることを示した。さらにRAG遺伝子の発現とリコンビナーゼ活性が相関することを組み替え基質を用いて検証した(Tagoh,et al.Blood 1996)。(4)ディファレンシャルディスプレイ法を用いてストローマ細胞に発現しRAG遺伝子の発現を促進する新しい遺伝子を単離することに成功した。遺伝子の発現実験によりこの遺伝子がRAG遺伝子の発現に関与することが示された(Tagoh et al.BBRC,1996)。

（1）使用抹布基因的一部分作为探针分离人RAG1基因组基因，并分析了结构和启动子位点。基础转录调节RAG1为CCAAT，位于抹布基因的第一个外显子上游约100 bp（Kurioka等人，分子Lmmunol。1996）。（2）通过DNAase Supersitivity（HS）确定Rag1基因附近的染色质结构。结果，揭示了有几个HS位点与RAG1基因的表达相关。已经证实，当将这些HS位点（启动子位点）引入未表达RAG1基因的细胞中时，获得了启动子活性。这表明RAG1基因的特定表达取决于启动子区域中染色质结构的变化（Kitagawa等，Blood，1996）。（3）我们表明，用骨髓衍生的基质细胞和细胞因子刺激人淋巴细胞祖细胞系可诱导抹布基因的表达。这还表明，基质细胞和淋巴细胞祖细胞上的分子之间的直接接触对于它们的表达至关重要。此外，使用重组底物验证了抹布基因表达与重组酶活性之间的相关性（Tagoh等人1996）。（4）我们成功地分离了一种新基因，该基因通过使用差分显示方法促进了抹布基因的表达。基因表达实验表明，该基因与抹布基因的表达有关（Tagoh等人BBRC，1996）。