Ig/TCR再構成のPCR解析を利用したリンパ系腫瘍に対する免疫療法の試み

使用 Ig/TCR 重排的 PCR 分析尝试淋巴肿瘤的免疫治疗

• 批准号: 07671207
• 负责人: 井本 しおん
• 金额: --
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07671207/
• 关键词: 免疫グロブリン遺伝子再構成; T細胞受容体遺伝子再構成; 腫瘍クローン; 腫瘍特異抗原; 微小残存腫瘍; 腫瘍特異免疫; ペプチドワクチン

I.IgH/TCR gene rearrangement 解析による腫瘍クローンの同定1)臨床検体(ALL 11例、NHL 14例、CLL 2例、CML blast crisis 1例、plasmacytoma 1例)よりDNAおよびRNAの抽出を行い、まずsouthern blottingにてrearrangementを検索した。この方法では約30%にrearrangementを検出した。2)PCR; IgH, TCR_γ, TCRδ各遺伝子可変領域のconsensusu sequenceをprimerとし、PCRでclonal band(s)の検出を試みた。まず、腫瘍細胞株(B細胞系; Raji cell, NALM 16, T細胞系; Jurkatt cell Molt 3,Molt 16)を用いてPCRの最適条件を確立した。それに基づき臨床検体の検索を遂行中であり、現在までに約60%にPCRでrearrangementを検出できた。3)Sequencing; PCR陽性例についてsequencingを開始している。4)MRDの検出; PCR陽性例では、治療後の定期的なサンプリング分についてもPCRを行い、MRDの検索を進めつつある。II.MRDに対する免疫療法の試み1)抗腫瘍活性測定; 患者末梢血リンパ球の免疫機能を、NK活性、リンパ球サブセットなどを指標に治療前後で比較すると共に、抗腫瘍活性を腫瘍細胞(primary cultureまたは細胞株を使用)と混合培養し、殺細胞活性をflow cytometry (propidium iodide取り込み)を用いて検討している。ペプチドワクチンについてはsequencingができ次第進めていく予定である。

一、IgH/TCR基因重排分析鉴定肿瘤克隆 1）从临床标本中提取DNA和RNA（ALL 11例，NHL 14例，CLL 2例，CML急变1例，浆细胞瘤1例）。 Southern blotting中的重排。该方法检测到约30%的重排。 2) PCR；以IgH、TCR_γ和TCRδ基因可变区的共有序列为引物，我们尝试通过PCR检测克隆带。首先，使用肿瘤细胞系（B 细胞系；Raji 细胞、NALM 16；T 细胞系；Jurkatt 细胞 Molt 3、Molt 16）建立 PCR 的最佳条件。基于此，我们正在寻找临床标本，到目前为止，我们已经能够通过PCR检测出其中大约60%的重排。 3) 测序；PCR阳性病例已开始测序。 4）MRD检测；对于PCR阳性病例，治疗后也定期采样进行PCR，并正在进行MRD的寻找。二、MRD免疫治疗的尝试 1）抗肿瘤活性测定；采用NK活性、淋巴细胞亚群等指标比较治疗前后患者外周血淋巴细胞的免疫功能，并测定肿瘤细胞（原代培养）的抗肿瘤活性。或细胞系），并使用流式细胞术（碘化丙啶摄取）检查细胞杀伤活性。我们计划在测序完成后立即进行肽疫苗的研发。