ヒト組み換え活性化遺伝子(RAG)のゲノム構造の解析と転写調節機構の解明

人类重组激活基因（RAG）基因组结构分析及转录调控机制阐明

• 批准号: 09271211
• 负责人: 村口 篤
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09271211/
• 关键词: T細胞受容体遺伝子; 免疫グロブリン遺伝子; 遺伝子再構成; リコンビナーゼ; RAG; プロモーター; 転写調節; サイトカイン

1)ヒトRAGのゲノム構造に関する研究:ヒトRAG-1cDNAの断片を用いてRAG-1遺伝子の第一エクソンと第二エクソンを含むクローンを単離し、RAG1遺伝子のゲノム構造と転写開始点を決定した。次に、RAG2cDNAをプローブにしてRAG2遺伝子の第1エクソンと第2エクソンを含むクローンHRAG-4を単離し、制限酵素地図の作成および一部の塩基配列を決定した。同時に、RAG2遺伝子の転写開始点を決定し、RAG2ゲノム遺伝子構造を決定した。2)ヒトRAGのクロマチン構造に関する研究:RAG-1発現、非発現細胞、あるいは非リンパ系細胞におけるDNaseI高感受性領域の解析を行い、転写開始点の上流約3.5kbp(HS1)、約0.8kbp(HS2)、転写開始点付近(HS3)、イントロン(HS4)に合計4箇所のDNaseI高感受性領域が存在すること、HS1は全ての細胞株に認められたがHS2、3、4はRAG-1発現細胞株に特異的に認められることを明らかにした。3)ヒトRAGの転写調節に関する研究:RAG1遺伝子の転写開始点5′上流-2.8kbpまでの領域について、さまざまな挿入断片をルシフェラーゼ遺伝子に連結したベクターを作成しプロモーター活性を測定した。その結果、転写開始点5′上流-110bpから-86bpの領域がRAG-1遺伝子の基本的プロモーター活性に必要であること、転写開始点の上流97bpにあるCCAATboxがプロモーター活性に必須であることを明らかにした。この領域はDNaseI高感受性部位HS3に含まれていることから、RAG1の発現は、ccaat部位のクロマチン構造変化により制御されていると結論した。現在、同様の手法を用いてRAG2の転写調節に関する研究および他のシスエレメントに関する研究を行っている。

1）对人抹布的基因组结构的研究：使用人rag-1 cDNA的片段来分离包含RAG-1基因的第一和第二外显子的克隆，并确定RAG1基因的基因组结构和转录起源。接下来，使用RAG2 cDNA作为探针，分离了含有RAG2基因的第一和第二外显子的克隆HRAG-4，并制备限制酶图并确定部分核苷酸序列。同时，确定了RAG2基因的转录起源，并确定了RAG2基因组结构。 2）研究人rag的染色质结构：我们分析了DNasei敏感区域表达RAG-1表达，非表达细胞或非淋巴样细胞，并揭示了大约3.5 kbp（Hs1）的DNasei敏感区域，大约3.5 kbp（hs1），大约0.8 kbp（hs2），附近（hs2），近距离（hs2），and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and（HS）（HS）（HS）。在所有细胞系中都发现，但是在表达RAG-1的细胞系中特别发现了HS2、3和4。 3）关于人抹布的转录调控的研究：对于RAG1基因转录起点上游的区域，创建了一个载体，其中各种插入物与荧光素酶基因和启动子活性相关联。结果，据透露，RAG -1基因的基本启动子活性需要从-110 bp到-86 bp上游的区域，而CCAATBOX的转录启动子活性则是转录起始点上游97 bp的CCAATBOX，对于启动子活性至关重要。由于该区域包含在dnasei-high敏感的位点HS3中，因此我们得出的结论是，RAG1表达受CCAAT位点染色质结构的变化调节。目前，正在使用类似的技术来研究RAG2和其他顺式元件的转录调节。

项目成果

Kurioka,Hideyuki: "Isolation and characterization of a TATA-less promoter for the human RAG-1 gene." Molecular Immunology. 33・13. 1059-1066 (1996)

Kurioka，Hideyuki：“人类 RAG-1 基因的无 TATA 启动子的分离和表征。”33·13（1996）。

Kitagawa,Taro: "Chromatin structure and transcriptional regulation of human RAG-1 gene." Blood. 88・10. 3785-3791 (1996)

北川太郎：“人类 RAG-1 基因的染色质结构和转录调控”。 88・10 3785-3791（1996）。

Muraguchi,Atsushi: "Stromal cells and oytokines in the induction of recombination activating gene (RAG) expression in a human lymphoid progenitor cell." Leukemia and Lymphoma. (1997)

Muraguchi，Atsushi：“基质细胞和卵因子在人淋巴祖细胞中诱导重组激活基因（RAG）表达。”

Kishi,Hiroyuki: "A murine monoclonal antibody (928) recognizing a new epitope formed with a combination of HLA-DPA^*0201 and DPB1^*0301." Human Immunology. 56. 114-124 (1997)

Kishi,Hiroyuki：“一种鼠单克隆抗体 (928)，可识别由 HLA-DPA^*0201 和 DPB1^*0301 组合形成的新表位。”

Tagoh,Hiromi: "Induction of recombination activating gene expression in a human lymphoid progenitor cell line : requirement of two separate signals from stromal cells and cytokines." Blood. 88・12. 4463-4473 (1996)

Tagoh, Hiromi：“在人淋巴祖细胞系中诱导重组激活基因表达：需要来自基质细胞和细胞因子的两个单独信号。”血液 88・12 4463-4473。