選択性の高いタンパク質間相互作用制御化合物の探索技術

高选择性蛋白质-蛋白质相互作用控制化合物的搜索技术

基本信息

批准号：
20651052
负责人：
伊藤隆司
金额：
$ 2.05万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20651052/
关键词：
蛋白質間相互作用阻害剤 2ハイブリッドシステム質量分析

项目摘要

近年注目されているタンパク質間相互作用制御化合物の探索においては,標的相互作用を選択的に阻害して類似相互作用には影響を及ぼさない高い選択性(特異性)の確保が不可欠であり,高選択性を保証するスクリーニング系とin vivoでの選択性を定量的に評価する系が求められている。そこで本研究では,下記の2点につき検討を行った。(1)標的相互作用と対照相互作用を同一細胞でアッセイする独自の並列2ハイブリッド法を用いて,高選択性相互作用制御化合物をスクリーニングする系の構築を目指している。その第一歩として,ペプチドアプタマーのスクリーニングを行ない、昨年度までに,Cdc42に結合してその相互作用を阻害するアプタマーの単離に成功して、この手法の有効性を示した。その成果を踏まえて、今年度は更にスクリーニングを拡大するとともに、得られたペプチドアプタマーの性格付けを進めた。興味深いことにCdc42変異アレル特異的な結合を示すアプタマーも得られており、疾患の原因となる変異アレルの産物のみを阻害するような高特異性相互作用阻害剤単離の可能性が示唆された。(2)定量対象ペプチドを連結した人工タンパク質(Peptide-Concatenated Standard ; PCS)を標準物質とする独自の定量プロテオミクス技術(PCS-MS)を用いて,相互作用制御活性のin vivo評価系を構築することを目指している。そのための基盤として,昨年度に引き続きPCS用ペプチドの選定法に検討を加えて一定の選定法を確立した。実際にこれを用いて各種PCSの設計を進め、それらを階層的に用いる手法の開発にも成功した。

在近年来吸引注意力的蛋白质相互作用控制化合物时，必须选择性地抑制目标相互作用的高选择性（特异性），这一点不会选择性地影响相似的相互作用。体内的选择性和选择性。因此，在这项研究中，检查了以下两个点。（1）目的是创建一个系统，该系统使用专有平行2混合方法筛选高选择交互控制化合物，该方法可以评估目标相互作用并与同一单元格进行对比。第一步是筛选肽适体，到去年，它成功地隔离了适体，该适体与CDC42结合并抑制其相互作用，并显示了该方法的有效性。根据结果，今年，筛查进一步扩大，并促进了获得的肽适体的个性。有趣的是，还有一个CDC42突变的特异性键，表明可能会有高特异性相互作用抑制剂，仅抑制引起疾病的突变剂的产物。（2）使用独特的定量蛋白质组学技术（PCS-MS）配备了相互作用的体内评估系统，该技术使用人工蛋白质（肽共同的标准； PC），该蛋白质连接肽（PCS-MS）。那。作为此目的的基础，通过考虑去年选择PCS肽的方法来建立某种选择方法。实际上，它被用来设计各种PC，并成功地开发了一种以层次方式使用它们的方法。