WT1特異的不死化細胞傷害性T細胞クローンを用いたヒト白血病の免疫遺伝子治療

使用 WT1 特异性永生化细胞毒性 T 细胞克隆对人类白血病进行免疫基因治疗

基本信息

批准号：
12217104
负责人：
安川正貴
金额：
$ 3.14万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12217104/
关键词：
白血病細胞傷害性T細胞免疫療法遺伝子治療 WT1 HLA

项目摘要

白血病に対する免疫遺伝子治療の開発の目的で研究を遂行し、以下の結果が得られた。転写因子であるWT1は多くの白血病細胞で高発現されているが正常細胞にはほとんど発現されていないことから、WT1は白血病免疫療法の理想的標的抗原と考えられた。まず、日本人の60%以上が陽性であるHLA-A24(HLA-A*2402)のアンカーモチーフを有する9merのWT1由来ペプチドを作製した。健常人末梢血単球から誘導した樹状細胞にWT1ペプチドをパルスし、CD8陽性T細胞を繰り返し刺激した。その結果、WT1ペプチド特異的HLA-A24拘束性CD8陽性細胞傷害性T細胞(CTL)クローンを樹立し、TAK-1と名付けた。TAK-1はWT1を高発現している白血病細胞のうちHLA-A24陽性細胞に対してのみ細胞傷害性を示したが、HLA-A24陰性ならびにWT1発現を認めないリンパ腫由来細胞に対しては細胞傷害性を示さなかった。また、線維芽細胞や末梢血リンパ球などの正常細胞は、HLA-A24の有無に関わらず細胞傷害性を受けず、TAK-1は正常骨髄細胞増殖にも影響を与えなかった。次に、WT1特異的CTLクローンにHerpesvirus saimiri(HVS)を接種し、HVSによってTAK-1を不死化させた。不死化TAK-1は、本来の機能を維持したまま長期間の培養が可能であった。さらに、Herpes simplex virus thymidine kinase(TK)遺伝子をレトロウイルスベクターを用いて不死化TAK-1に導入した。現在、TK遺伝子導入不死化CTLの生体内での白血病細胞増殖抑制効果とガンシクロビルによる人為的排除を、ヒトがん細胞移入SCIDマウスの実験系で検討中である。本研究から得られた結果は、白血病に対する新たな免疫遺伝子治療の開発に結びつくものと考えられ、臨床応用を目指した検討を進めている。

我们以开发针对白血病的免疫基因疗法为目的进行了研究，并获得了以下结果。由于转录因子WT1在许多白血病细胞中高表达，而在正常细胞中几乎不表达，因此WT1被认为是白血病免疫治疗的理想靶抗原。首先，我们创建了一种 9mer WT1 衍生肽，具有 HLA-A24 (HLA-A*2402) 锚定基序，该基序对超过 60% 的日本人呈阳性。使用 WT1 肽脉冲源自健康个体外周血单核细胞的树突状细胞，以反复刺激 CD8 阳性 T 细胞。结果，建立了WT1肽特异性HLA-A24限制性CD8阳性细胞毒性T细胞（CTL）克隆并命名为TAK-1。在高表达WT1的白血病细胞中，TAK-1仅对HLA-A24阳性细胞表现出细胞毒性，但对HLA-A24阴性细胞和不表达WT1的淋巴瘤来源细胞没有表现出任何损伤。此外，无论HLA-A24是否存在，正常细胞如成纤维细胞和外周血淋巴细胞均不具有细胞毒性，并且TAK-1不影响正常骨髓细胞增殖。接下来，将WT1特异性CTL克隆接种Herpesvirus saimiri (HVS)，并通过HVS使TAK-1永生化。永生化TAK-1可以长期培养，同时保持其原有功能。此外，使用逆转录病毒载体将单纯疱疹病毒胸苷激酶（TK）基因导入永生化TAK-1中。我们目前正在使用人类癌细胞转染的 SCID 小鼠实验系统研究转染 TK 基因的永生化 CTL 的体内白血病细胞增殖抑制作用以及更昔洛韦的人工消除作用。这项研究获得的结果被认为有助于开发新的白血病免疫基因疗法，我们目前正在进行以临床应用为目的的研究。