白血病とウイルス特異的不死化細胞傷害性T細胞の細胞バンク化に向けての基礎研究

白血病细胞库和病毒特异性永生化细胞毒性T细胞的基础研究

基本信息

批准号：
15659229
负责人：
安川正貴
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

白血病と難治性ウイルス感染症に対する細胞免疫療法の開発目的で研究を遂行し、以下の成果を得た。1)白血病細胞に高発現し、正常細胞における発現量は極めて低値であるWT1およびhTERT特異的細胞傷害性T細胞(CTL)クローンを樹立した。これらのCTLクローンは白血病細胞や肺がん細胞などの固形癌細胞に対してHLAクラスI拘束性細胞傷害性を示した。CTLクローンをHerpesvirus saimiri感染によって不死化させた。不死化CTLクローンは抗原刺激なくして増殖を示し、本来の抗原特異性は保たれていた。さらに、thymidine kinase遺伝子を導入し、ガンシクロビル添加によって死滅することを確認した。2)腫瘍細胞に強い細胞傷害性を示すWT1特異的CD8陽性CTLクローンからT細胞レセプターα鎖およびβ鎖遺伝子をクローニングし、正常CD4陽性およびCD8陽性T細胞に遺伝子導入した。TCR遺伝子導入CD8陽性T細胞はWT1特異的細胞傷害活性を獲得し、白血病細胞に対してHLAクラスI拘束性に細胞傷害性を示した。同様に、TCR遺伝子導入CD4陽性T細胞もHLAクラスI拘束性にWT1特異的免疫応答を示し、Th1サイトカインを産生した。ただし、CD4陽性T細胞による機能発現には標的細胞上のHLAクラスIIとCD4分子との結合が必要であることも明らかとなった。3)HLA-DP5拘束性CD4陽性T細胞が認識する新たなWT1エピトープを同定した。このペプチド特異的CD4陽性T細胞はHLA-DP5拘束性かつWT1特異的に白血病細胞を傷害した。4)新たな免疫不全マウスにヒト造血幹細胞を移植することによってヒト免疫系を構築したマウスを作製した。今後、ヒトにおけるワクチン開発に有用であると思われる。以上の研究成果から、白血病ならびに難治性ウイルス感染症に対する効果的で安全な新たな細胞免疫療法の開発が可能であることが示された。

该研究的目的是开发针对白血病和难治性病毒感染的细胞免疫疗法，并获得了以下结果。 1）建立了WT1和HTERT特异性细胞毒性T细胞（CTL）克隆，这些克隆在白血病细胞中高度表达，并且在正常细胞中的表达水平极低。这些CTL克隆表现出HLA I类对固体癌细胞（如白血病细胞和肺癌细胞）的细胞毒性限制。 CTL克隆通过Saimiri感染使CTL克隆永生。永生的CTL克隆在没有抗原刺激的情况下显示出增殖，并保持其原始抗原特异性。此外，引入了胸苷激酶基因，并确认它是通过添加Ganciclovir杀死的。 2）从WT1特异性CD8阳性CTL克隆中克隆T细胞受体α-和β链基因，这些CTL克隆在肿瘤细胞中表现出很强的细胞毒性，并将基因转染到正常的CD4阳性和CD8阳性T细胞中。 TCR转基因CD8阳性T细胞获得了WT1特异性细胞毒性活性，并表现出对白血病细胞的HLA I类限制性细胞毒性。同样，TCR转基因CD4阳性T细胞也显示出HLA I限制的WT1特异性免疫反应并产生Th1细胞因子。然而，也已经表明，CD4阳性T细胞的功能表达需要HLA II类和CD4分子在靶细胞上的结合。 3）我们确定了由HLA-DP5限制的CD4阳性T细胞识别的新的WT1表位。该肽特异性的CD4阳性T细胞受伤的白血病细胞以HLA-DP5限制性和WT1特异性方式。 4）制备小鼠，其中通过将人造血干细胞移植到新的免疫缺陷小鼠中来构建人类免疫系统。据信这对于将来的人类开发疫苗很有用。上述研究结果表明，可以开发新的细胞免疫疗法，这些免疫疗法对白血病和难治性病毒感染既安全又安全。