WT1特異的不死化細胞傷害性T細胞クローンを用いたヒト白血病の免疫遺伝子治療

使用 WT1 特异性永生化细胞毒性 T 细胞克隆对人类白血病进行免疫基因治疗

基本信息

批准号：
11140251
负责人：
安川正貴
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11140251/
关键词：
白血病免疫遺伝子治療 WT1 細胞傷害性T細胞 HLA Herpesvirus saimiri

项目摘要

白血病の新たな免疫遺伝子治療の開発を目的に研究を行い、下記の研究成果を得た。1)急性白血病ならびに慢性骨髄性白血病急性転化で高率に発現されるWT1のアミノ酸配列から、日本人の約60%が陽性であるHLA-A^*2402結合モチーフを同定した。2)このモチーフを有する9merペプチドを作製し、健常者末梢血単核球から誘導した樹状細胞(DC)にパルスし、自己CD8陽性T細胞をくり返し刺激した。この方法によって、WT1ペプチド特異的HLA-A24拘束性細胞傷害性T細胞クローンTAK-1を樹立した。3)TAK-1は、WT1を発現したHLA-A24陽性白血病細胞に対して特異的に細胞傷害性を示し、正常細胞には全く傷害性を示さなかった。4)健常者骨髄細胞の増殖にも全く影響は認められなかった。5)TAK-1を新世界猿のウイルスであるHerpesvirus saimiri(HVS)により不死化させた。HVS不死化TAK-1は、抗原刺激なくして長期間培養でき、本来のTAK-1同様の抗原特異性を示した。5)この不死化TAK-1に自殺遺伝子を導入する目的で、Herpes simplex virus-1由来thymidine kinase(tk)遺伝子を組み込んだレトロウイルスベクターを作製した。現在、このベクターを用いて不死化TAK-1にtk遺伝子を導入している。以上の結果から、新たなヒト白血病特異的標的抗原が明らかとなり、自殺遺伝子を導入したHVS不死化細胞傷害性T細胞は、白血病に対する免疫遺伝子治療に有用であると考えられる。

我们以开发一种新的白血病免疫基因疗法为目标进行了研究，并获得了以下研究成果。 1）从在急性白血病和慢性粒细胞白血病急变中高表达的WT1的氨基酸序列中，我们鉴定出了HLA-A^*2402结合基序，该基序在约60%的日本人中呈阳性。 2) 制备具有该基序的 9mer 肽，脉冲至源自健康受试者外周血单核细胞的树突状细胞 (DC)，并重复刺激自体 CD8 阳性 T 细胞。通过该方法，建立了WT1肽特异性HLA-A24限制性细胞毒性T细胞克隆TAK-1。 3) TAK-1对表达WT1的HLA-A24阳性白血病细胞具有特异性细胞毒性，对正常细胞无细胞毒性。 4) 未观察到对健康受试者骨髓细胞增殖的影响。 5) TAK-1 被新世界猴病毒 saimiri 疱疹病毒 (HVS) 永生化。 HVS永生化TAK-1可以在没有抗原刺激的情况下长时间培养，并且表现出与原始TAK-1相似的抗原特异性。 5）为了将自杀基因引入这种永生化的TAK-1中，我们创建了一种逆转录病毒载体，其中包含源自单纯疱疹病毒1的胸苷激酶（tk）基因。目前，我们正在使用该载体将tk基因导入永生化TAK-1中。根据以上结果，已经揭示了新的人类白血病特异性靶抗原，并且引入了自杀基因的HVS永生化细胞毒性T细胞被认为可用于针对白血病的免疫基因治疗。