相互作用蛋白の遺伝子クローニングによる転写因子NF-κBの機能・制御系の解析

通过相互作用蛋白基因克隆分析转录因子NF-κB的功能和控制系统

基本信息

批准号：
12028230
负责人：
岡本尚
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12028230/
关键词：
転写 NF-κB コンプレッサー TFIID Groucho FUS TLS RelA アポトーシス

项目摘要

誘導型の転写因子であるNF-κBは、蛋白間相互作用により活性調節を受けるとともにその機能を発現する。そこで、培養細胞からの生化学的方法による精製と酵母の遺伝系を用いたtwo-hybrid screening法によりNF-κBの主要サブユニットであるp65(RelA)と結合する一連の蛋白分子の同定と遺伝子クローニングを実施することにより、NF-κBの持つ種々の生物学的作用(転写活性化とアポトーシス抑制機構、など)の発現と調節機構に関わる未知の因子を同定することを目的に研究を進めた。その結果、今年度はp65の転写活性化ドメインに結合する因子として新たに転写コレプレッサー蛋白AES/TLE(Groucho related genes)とFUS/TKSを同定した。興味深いことに、FUS/TLSはAES/TLEによる転写抑制を解除し、また逆にAES/TLEはFUS/TLSによるNF-κBによる転写の活性化を抑えた。FUS/TLSはTAFII蛋白のひとつと考えられており転写基本因子TFIIDの一部を構成することから、AES/TLEによるコレプレッサー作用はNF-κBの転写活性化に関わる特定のTFIIDのリクルートを排除するためと考えられた。コレプレッサーとTAII蛋白の競合作用の発見は一般的な転写制御の立場からも重要な意義を持つ。また、すでにp65中央部分に結合する因子として同定した53BP2のアポトーシス誘導作用とそのがん細胞株での発現の意義を明らかにし、NF-κBのアポトーシス抑制機構には遺伝子発現を必要としない経路があることを確かめた。今後は、NF-κBを中心とする相互作用因子の同定をさらに進めるとともに、これらの分子間相互作用の全体像を細胞という限られた空間の中で解明していき、NF-κBの生物学的作用機構をさらに明らかにしたいと考えている。

NF-κB是一种诱导的转录因子，受蛋白质之间的相互作用的调节，并表达其功能。因此，通过培养细胞的生物化学方法使用酵母遗传系统的TW杂交筛选方法，以及与NF-κB的主要亚基p65（RELA）结合的一系列蛋白质分子的基因鉴定。通过进行克隆，我们一直在进行研究，以确定NF-κB各种生物学作用（例如转录激活和凋亡抑制机制等）的表达，并确定与协调机制相关的未知因素。结果，今年确定了与p65转移活化域结合的因素，新的转移收集器蛋白AES/TLE（Groucho相关基因）和FUS/TKS被鉴定出来。有趣的是，FUS/TLS通过AES/TLE取消了转移控制，相反，AES/TLE减少了FUS/TLS通过NF-κB传递的激活。 FUS/TLS被认为是TAFII蛋白之一，并且由于它配置了转移基本因子TFIID的一部分，因此AES/TLE的作用消除了与NF-κB转录激活相关的特定TFIID募集是。从一般转移控制中，折叠板和太极蛋白之间竞争的发现很重要。此外，它阐明了53 bp2凋亡诱导效应及其在癌细胞库存中的表达的重要性，癌细胞库存已经被确定为与中心部分结合的因素，并且不需要在NF-κB凋亡中表达基因表达我确认有机制。将来，将进一步促进以NF-κB为中心的相互作用因子的鉴定，这些间相互作用的全部图像将在有限的空间中阐明，并在NF-κB的生物学中阐明。目标机制。