相互作用蛋白の遺伝子クローニングによる転写因子NF-κBの機能・制御系の解析

通过相互作用蛋白基因克隆分析转录因子NF-κB的功能和控制系统

基本信息

批准号：
12028230
负责人：
岡本尚
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12028230/
关键词：
転写 NF-κB コンプレッサー TFIID Groucho FUS TLS RelA アポトーシス

项目摘要

誘導型の転写因子であるNF-κBは、蛋白間相互作用により活性調節を受けるとともにその機能を発現する。そこで、培養細胞からの生化学的方法による精製と酵母の遺伝系を用いたtwo-hybrid screening法によりNF-κBの主要サブユニットであるp65(RelA)と結合する一連の蛋白分子の同定と遺伝子クローニングを実施することにより、NF-κBの持つ種々の生物学的作用(転写活性化とアポトーシス抑制機構、など)の発現と調節機構に関わる未知の因子を同定することを目的に研究を進めた。その結果、今年度はp65の転写活性化ドメインに結合する因子として新たに転写コレプレッサー蛋白AES/TLE(Groucho related genes)とFUS/TKSを同定した。興味深いことに、FUS/TLSはAES/TLEによる転写抑制を解除し、また逆にAES/TLEはFUS/TLSによるNF-κBによる転写の活性化を抑えた。FUS/TLSはTAFII蛋白のひとつと考えられており転写基本因子TFIIDの一部を構成することから、AES/TLEによるコレプレッサー作用はNF-κBの転写活性化に関わる特定のTFIIDのリクルートを排除するためと考えられた。コレプレッサーとTAII蛋白の競合作用の発見は一般的な転写制御の立場からも重要な意義を持つ。また、すでにp65中央部分に結合する因子として同定した53BP2のアポトーシス誘導作用とそのがん細胞株での発現の意義を明らかにし、NF-κBのアポトーシス抑制機構には遺伝子発現を必要としない経路があることを確かめた。今後は、NF-κBを中心とする相互作用因子の同定をさらに進めるとともに、これらの分子間相互作用の全体像を細胞という限られた空間の中で解明していき、NF-κBの生物学的作用機構をさらに明らかにしたいと考えている。

NF-κB是一种诱导的转录因子，受蛋白质蛋白质相互作用的调节并表达其功能。因此，进行研究的目的是通过通过生化方法纯化培养的细胞以及使用酵母遗传系统来纯化培养的细胞，以鉴定NF-κB（转录激活和抑制机制的各种生物学作用（转录激活和凋亡抑制机制）的各种生物学作用）的未知因素。结果，今年，我们确定了新的转录收集器蛋白AES/TLE（Groucho相关基因）和FUS/TKS是与p65的转录激活结构域结合的因素。有趣的是，FUS/TLS通过AES/TLE消除了转录抑制作用，相反，AES/TLE抑制了NF-κB通过FUS/TLS的转录激活。 FUS/TLS被认为是TAFII蛋白质之一，构成了转录基本因子TFIID的一部分，而AES/TLE的隔膜作用被认为消除了参与NF-κB转录激活的特定TFIID的募集。从一般的转录调节的角度来看，射磷脂和太极蛋白的竞争作用的发现很重要。我们还阐明了53BP2的凋亡诱导作用，该诱导效应已经被确定为与p65的中心结合的因素及其在癌细胞系中的表达，并确认存在一种途径，在NF-κB抑制NF-κB的凋亡机制中不需要基因表达。将来，我们希望进一步识别相互作用因子，主要是NF-κB，并阐明细胞有限空间内这些分子间相互作用的整体情况，进一步阐明了NF-κB的生物学机制。