ペルオキシソームの生合成初期過程の解明

阐明过氧化物酶体生物发生的初始过程

基本信息

批准号：
00F00350
负责人：
藤木幸夫
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞内小器官ペルオキシソームは近年多くの重要な代謝機能の解明やその障害は遺伝性の致死的疾患をもたらすことから、プロテイントラフィック分子機構解明のモデル系としても広く研究されている。私たちはペルオキシソームの形成機構やその障害機構の解明に向けて,現在までに13の異なるペルオキシソーム欠損性CHO(Chiniese Hamster Ovay)細胞変異株を分離し,相補遺伝子(PEX)の単離とその転写・翻訳産物(ペルオキシン)の機能ならびにZellweger症候群を代表とするペルオキシソーム形成異常症の原因遺伝子解明を目的として研究を行っている。エル・シャムリー博士は、哺乳動物系においても20以上のPEX相補性群の存在が推定されるところから、より蛍光高度の強いEnhanced green fluorescent protein(EGFP)とcatalaseの融合タンパク質を輸送マーカーとして新たなペルオキシソーム欠損性CHO変異細胞の分離を試み、先に分離されているZP114と同一相補性群に属する変異細胞の分離に成功した。また、ペルオキシソーム局在化シグナル1および2型(PTS1,PTS2)細胞質レセプターPex5P,Pex7のペルオキシソーム膜上ドッキング部位であるPex14Pの機能とその制御機構を明らかにすべく、翻訳後修飾(リン酸化)を細胞培養時に無血清から血清培地に変えた際に起こることを見出し、Pex14Pの大量発現系の確立ついでそのリン酸化部位の同定と生理学的意義について検討した。

近年来，细胞内细胞器过氧化物酶体作为阐明蛋白质运输分子机制的模型系统已被广泛研究，因为许多重要的代谢功能已被阐明，其紊乱可导致遗传性致命疾病。为了阐明过氧化物酶体的形成及其损伤的机制，目前已分离出13种不同的过氧化物酶体缺陷型CHO（中国仓鼠卵）细胞突变体，分离出互补基因（PEX），并分离了其转录。・我们正在与目的是阐明翻译产物（过氧化物酶）的功能和过氧化物酶体发育不良（例如齐薇格综合征）的致病基因。由于哺乳动物系统中估计存在超过20个PEX互补基团，El-Shamry博士提出了一种新的转运标记，使用增强型绿色荧光蛋白（EGFP）和过氧化氢酶的融合蛋白，其具有更强的荧光，我们尝试分离过氧化物酶体。 -缺陷型CHO突变细胞，并成功分离出与之前分离的ZP114属于同一互补组的突变细胞。此外，为了阐明Pex14P（过氧化物酶体膜上过氧化物酶体定位信号1型和2型（PTS1、PTS2）细胞质受体Pex5P和Pex7的对接位点）的功能和调节机制，我们研究了翻译后修饰（我们发现在细胞培养过程中从无血清培养基更换为血清培养基时会发生这种情况，建立了 Pex14P 的大规模表达系统，鉴定了磷酸化位点，并研究了其生理意义。