ペルオキシン群の分子動態とペルオキシソーム形成および細胞機能の制御

过氧化物酶基团的分子动力学以及过氧化物酶体形成和细胞功能的调节

基本信息

批准号：
14037253
负责人：
藤木幸夫
金额：
$ 2.56万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)PTS2レセプターPex7pの機能、機能不全、細胞内局在について、独自に分離したpex7CHO変異細胞ZPG207およびPEX7異常RCDP患者由来線維芽細胞を用いて検討した。PTS2およびPex5pLとの結合にはほぼ全長が必要であること、RCDP患者中現在までに報告されている3種の変異(L292ter, G217R, A218V)およびZPG207由来Pcx7p-W221terはいずれもPTS2およびPex5pLとの結合活性を失うことを見出した。さらにPex7pは細胞質に大半は存在するが、一部はPcx5pL依存的にペルオキシソームマトリックス内に局在化することから、Pex5pと同様にshuttling receptorとして機能しているものと結論した。2)先にクローニングした相補性群D群(欧米9群)のペルオキシソーム形成異常症原因遺伝子PEX16に関し、新たなZellwger症候群2患者の変異解析を行い、両者ともにexon10-skippingを引き起こす同じ変異(IVS10+2T->C)を見出した。3)従来、相補性群11群(PEX7障害性)CHO変異細胞はZPG207のみであったが、新たな変異細胞の分離へ向けたスクリーニングにより、2種のpex7変異細胞ZPEG227およびZPEG231の単離に成功、ZPEG227はPex7p-W158terを有していることを明らかにした。同様に、新たな表現型を示すpex2変異細胞ZPEG309を単離した。4)ペルオキシソームの膜アセンブリーに必須なPex16pのペルオキシソーム膜局在化シグナルを解明した。また、ペルオキシソームの増殖・分裂に関わるペルオキシン、Pex11pαおよびPex11pβに加えてPex11pγのクローニングにも成功した。5)長年不明であった相補性群A群(欧米8群)の相補遺伝子の解明を試み、CHO変異細胞ZPG167およびヒト腎臓cDNAライブラリーを用いた機能相補活性スクリーニング法により、ついに新規遺伝子PEX26のクローニングに成功した。さらに同相補性群NALD患者由来線維芽細胞に対してもPEX26はペルオキシソームの形成を回復させ、かつ患者PEX26遺伝子に変異を認めたことから、相補遺伝子はPEX26と結論した。これで、12の相補性群に分類されるペルオキシソーム形成異常症のすべての病因遺伝子が解明されたことになる。

1）使用独立分离的PEX7CHO可变细胞ZPG207和PEX7异常RCDP患者振动细胞检查PTS2受体PEX7P功能，功能失效和细胞内位置。 PTS2和PEX5PL的组合几乎需要总长度，而RCDP患者（L292TER，G217R，A218V）和ZPG207衍生的PCX7P-W221Ter的三种类型都是PTS2和PEX5PE。此外，PEX7P主要在细胞质中，但部分定位在pelooxisome矩阵中以及PEX5P中，已被视为班车受体。 2）关于PEX16，互补组的基于Pelooger的异常（欧洲9组，美国和欧洲），进行了新的Zellwgar综合征2患者突变体分析，并且两者都是相同的突变，导致Exon10-Skipping （IVS10+（IVS10+）我找到了2T-> c）。 3）以前，11组互补组（PEX7障碍）CHO突变细胞仅是ZPG207，但是通过筛选到分开的新突变细胞，两个PEX7突变细胞ZPEG227和ZPEG231成功。。同样，隔离了一种新的表达类型的PEX2突变细胞ZPEG309。 4）已阐明了对过氧化物酶体膜组件必不可少的PEX16P peloxisome国际信号。除了涉及过氧化物酶体的增殖和分裂的Pelooxin，PEX11Pα和PEX11Pβ之外，它还成功地克隆了PEX11Pγ。 5）试图在A组A组中阐明互补基因（欧洲和美国的8组），这是多年来未知的，最后是使用CHO VARIABLE Cell ZPG167和人类肾脏的活动筛选方法的功能阶段cDNA文库，最后是新基因的新基因PEX26。此外，PEX26回收了过氧化物酶体的形成，并在患者PEX26基因中识别出相互补体组NALD患者衍生成成纤维细胞的突变。这是对过氧化物酶形成的所有病原基因的阐明，该基因被分类为12个互补组。