化学発癌剤等による精子形成不全と協調するタンパク質DJ-1-男性抗不妊薬の可能性-

DJ-1，一种与化学致癌剂等引起的精子发生缺陷相配合的蛋白质 - 作为男性抗不育药物的可能性 -

基本信息

批准号：
11877397
负责人：
有賀寛芳
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.DJ-1遺伝子の単離とプロモーター解析マウスDJ-1 cDNAをプローブとして、ES細胞ゲノムライブラリーよりゲノムDNAをまずクローニングした。高々21KDaと小さなDJ-1タンパク質であるが、10個以上にあたるエキソンを有するものであった。DJ-1遺伝子発現制御機構の解析のために、転写開始点上流にルシフェラーゼ遺伝子を連結させた各種欠損レポーター遺伝子を作製、培養細胞に導入することでプロモーター解析も既に終了した(Taira et al.投稿中)。2.DJ-1とその結合タンパク質のDJ-1機能への関わりDJ-1をbaitとしたtwo-hybridスクリーニングにより複数のDJ-1結合タンパク質cDNAを単離し、Ubc9,アンドロゲン受容体(AR)インヒビターPIASxa/ARIPS,新規タンパク質3種を同定した.Ubc9によるDJ-1へのSUMO-1付加によりDJ-1は核膜周辺に局在が変動した.DJ-1結合タンパク質として同定したARインヒビターPIASxa./ARIPS,AR,DJ-1との相互関係をAR結合配列をレポーターとしたルシフェラーゼアッセイ,in vitropull-down法,共免疫沈降法で詳細に検討し,DJ-1はPIASxa./ARIPSを吸収することによりARを活性化するARの正因子であることが明らかとなった.3.内分泌かく乱物質,不妊とDJ-1との相関マウスにオルニタゾールなどの内分泌かく乱物質を投与するとオスマウスは不妊となるが,これと平行してDHJ-1が顕著に減少した.また,種々の男性不妊患者の精液中のDJ-1は健常人に比較して顕著に減少していた.これより,DJ-1が精子形成に関与し,男性不妊のターゲットタンパク質である可能性が強く示唆された.

1.DJ-1基因分离和启动子分析首先使用小鼠DJ-1 cDNA作为探针从ES细胞基因组文库中克隆基因组DNA。 DJ-1蛋白很小，最多21KDa，但有10多个外显子。为了分析DJ-1基因表达控制机制，通过创建各种有缺陷的报告基因（其中荧光素酶基因连接在转录起始位点的上游）并将其导入培养细胞中，已经完成了启动子分析（Taira等人，中））。 2. DJ-1 及其结合蛋白参与 DJ-1 功能我们以 DJ-1 为诱饵，通过二杂交筛选分离了多个 DJ-1 结合蛋白 cDNA，并鉴定了雄激素受体 (AR) 抑制剂 Ubc9。 /ARIPS，3 种新蛋白质Ubc9 将 SUMO-1 添加到 DJ-1 中，导致 DJ-1 使用 AR 结合序列作为报告基因改变其在核膜周围的定位。使用体外下拉和免疫共沉淀的详细研究表明，DJ-1 是 AR 的阳性因子，通过吸收 PIASxa./ARIPS 激活 AR。 3. 内分泌干扰物质、不孕症与 DJ-1 内分泌干扰物之间的相关性。奥硝唑在小鼠中的作用此外，与健康个体相比，各种男性不育患者精液中的DJ-1显着减少，这强烈表明DJ-1参与精子发生，可能是男性不育的靶蛋白。