ガラクトース転移酵素遺伝子ノックアウトマウスを用いた糖鎖機能の解析

使用半乳糖基转移酶基因敲除小鼠分析聚糖功能

基本信息

批准号：
11159202
负责人：
浅野雅秀
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

交雑系(129XC57BL/6)のGalT-I KOマウスは正常に発生するが,C57BL/6に8世代戻し交配したKOマウスは胎生後期から成長の遅延が認められ,出生時に100%死亡することを明らかにした。そこでさらにBALB/cに戻し交配すると,今度は胎生中期に致死となることがわかった。胎生10.5日ですでに発生の異常が認められ,出生前には胎児は吸収されてしまって存在しない。現在,その死亡原因を解析しているところである。また,マウスの遺伝的背景によってこのように大きく死亡時期が異なる理由についても今後解析していく。GalT-Iは主としてN型糖鎖の合成に関わると言われていたが,GalT-I KOマウス(交雑系)の赤血球膜上の糖鎖構造を詳細に解析したところ,Core2のO型糖鎖の合成も著しく阻害されていることが明らかとなった。Core2 O型糖鎖のβ-1,4ガラクトース側鎖はセレクチンのリガンド糖鎖であるシアリルLe^xの形成に必須であるので,このマウスはセレクチンのリガンド糖鎖の発現が低下している可能性が考えられた。白血球膜上のCore2のO型糖鎖の合成も著しく阻害されており,実際,このマウスの好中球や単球へのP-セレクチンの結合が低下していた。遅延型接触過敏症反応はセレクチンが重要な働きをしていることが知られているが,TNCBに対するこの反応がGalT-I KOマウスでは有意に抑制されていることがわかった。さらにその際,ランゲルハンス細胞のリンパ節への遊走能が阻害されていることを示す結果も得ている。以上の結果から,いくつか見つかったGalT遺伝子の中でもGalT-Iはセレクチンのリガンド糖鎖の合成に大きく関与しており,GalT-I KOマウスはセレクチンシステムの欠損による免疫系の異常が見られた。

杂交系(129XC57BL/6)的GalT-I KO小鼠发育正常，但与C57BL/6回交8代的KO小鼠从胚胎晚期开始生长迟缓，100%出生时死亡。因此，发现与BALB/c进一步回交会导致胚胎中期致死。妊娠10.5天时已观察到发育异常，胎儿在出生前已被吸收且不再存在。目前我们正在分析死因。我们还将分析死亡时间因小鼠遗传背景而有很大差异的原因。据说GalT-I主要参与N-聚糖的合成，但对GalT-I KO小鼠（杂交品系）红细胞膜上糖链结构的详细分析表明，Core2的O-聚糖还发现的合成受到显着抑制。由于 Core2 O-聚糖的 β-1,4 半乳糖侧链对于唾液酸 Le^x（一种选择素配体糖链）的形成至关重要，因此该小鼠的选择素配体糖链表达可能降低。被考虑。白细胞膜上 Core2 O-聚糖的合成也受到显着抑制，事实上，这些小鼠中 P-选择素与中性粒细胞和单核细胞的结合减少了。已知选择素在迟发型接触性超敏反应中发挥重要作用，并且发现这种对 TNCB 的反应在 GalT-I KO 小鼠中被显着抑制。此外，我们还获得了表明朗格汉斯细胞迁移至淋巴结的能力受到抑制的结果。从以上结果来看，发现的几个GalT基因中的GalT-I显着参与选择素配体糖链的合成，并且GalT-I KO小鼠由于选择素系统的缺陷而出现免疫系统异常。