ガラクトース転移酵素遺伝子ノックアウトマウスを用いた糖鎖機能の解析

使用半乳糖基转移酶基因敲除小鼠分析聚糖功能

基本信息

批准号：
11159202
负责人：
浅野雅秀
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

交雑系(129XC57BL/6)のGalT-I KOマウスは正常に発生するが,C57BL/6に8世代戻し交配したKOマウスは胎生後期から成長の遅延が認められ,出生時に100%死亡することを明らかにした。そこでさらにBALB/cに戻し交配すると,今度は胎生中期に致死となることがわかった。胎生10.5日ですでに発生の異常が認められ,出生前には胎児は吸収されてしまって存在しない。現在,その死亡原因を解析しているところである。また,マウスの遺伝的背景によってこのように大きく死亡時期が異なる理由についても今後解析していく。GalT-Iは主としてN型糖鎖の合成に関わると言われていたが,GalT-I KOマウス(交雑系)の赤血球膜上の糖鎖構造を詳細に解析したところ,Core2のO型糖鎖の合成も著しく阻害されていることが明らかとなった。Core2 O型糖鎖のβ-1,4ガラクトース側鎖はセレクチンのリガンド糖鎖であるシアリルLe^xの形成に必須であるので,このマウスはセレクチンのリガンド糖鎖の発現が低下している可能性が考えられた。白血球膜上のCore2のO型糖鎖の合成も著しく阻害されており,実際,このマウスの好中球や単球へのP-セレクチンの結合が低下していた。遅延型接触過敏症反応はセレクチンが重要な働きをしていることが知られているが,TNCBに対するこの反応がGalT-I KOマウスでは有意に抑制されていることがわかった。さらにその際,ランゲルハンス細胞のリンパ節への遊走能が阻害されていることを示す結果も得ている。以上の結果から,いくつか見つかったGalT遺伝子の中でもGalT-Iはセレクチンのリガンド糖鎖の合成に大きく関与しており,GalT-I KOマウスはセレクチンシステムの欠損による免疫系の異常が見られた。

尽管通常发生混合系统中的Galt-i KO小鼠（129xC57BL/6），但8代被反向C57BL/6的KO小鼠显示出胚胎后期的生长延迟，而出生时间的100％。然后发现，当混合物返回到BALB/C时，现在发现这一次在中期时期将是致命的。在胎儿寿命的10.5天内已经观察到发育异常，胎儿被吸收，出生前不存在。目前，正在分析死亡原因。我们还将分析为什么死亡时间取决于小鼠的遗传背景显着不同的原因。据说Galt-I主要参与N型聚糖的合成，但对Galt-I KO小鼠的红细胞膜上的聚糖结构进行了详细分析（混合系统）表明，Core2的O型Glycan的合成也受到了显着抑制。由于Core2 O型聚糖的β-1,4半乳糖侧链对于siAllyl le^X的形成至关重要，因此，selectin的配体糖胶是selectin的配体聚糖，因此人们认为在小鼠中selectin的配体聚糖的表达降低。还显着抑制了白细胞膜上CORE2的O-聚糖细胞链的合成，实际上，p-选择素与中性粒细胞和小鼠单核细胞的结合减少了。众所周知，选择素在延迟接触性超敏反应中起重要作用，但是对TNCB的这种反应在Galt-I KO小鼠中受到了显着抑制。此外，结果表明，Langerhans细胞迁移至淋巴结的能力受到抑制。从上述结果中，在发现的几个GALT基因中，Galt-I很大程度上参与了Selectin的配体聚糖的合成，而Galt-I KO小鼠由于有缺陷的选择素系统而在免疫系统中表现出异常。