糖転移酵素遺伝子欠損マウスを用いた発癌・転移における糖鎖機能の解析

使用糖基转移酶基因缺陷小鼠分析致癌和转移中的聚糖功能

基本信息

批准号：
12215036
负责人：
浅野雅秀
金额：
$ 2.82万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12215036/
关键词：
糖転移酵素遺伝子腫瘍抗原シアリルLe^x メチルコラントレン

项目摘要

癌細胞の表面には特徴的な糖鎖構造が見い出されており,それらが細胞のがん化と浸潤,転移に関連していると言われている。実際,癌細胞特異的な腫瘍抗原の多くは糖鎖抗原であり,腫瘍マーカーとして診断にも利用されている。本研究では,我々が作製したGalT-I欠損マウスを用いて,これらの腫瘍抗原,特にシアリルLe^xなどの糖鎖構造が,細胞のがん化と形成された腫瘍細胞の増殖や浸潤,転移などの性質に与える影響を明らかにする。そのために,本年度は化学発がん剤による発がん実験及び腫瘍細胞株の単離とその性質の解析を行った。GalT-Iホモ欠損マウスとヘテロ欠損マウスの皮膚に0.5%メチルコラントレン(MC)を0.05mlずつ週2回計10回塗布し,経時的に腫瘍形成を観察した。塗布終了後140日後まで観察したところ,どちらのマウスにおいても60日から100日後ぐらいから乳頭腫様の腫瘍形成が認められ,腫瘍の数には有意な差は認められなかった。しかし140日後までに直径10mm以上の腫瘍を形成したマウスは,GalT-I欠損マウスの方が少なく,GalT-I欠損マウスでは腫瘍の増殖速度が遅い傾向が見られた。次にこれらの腫瘍から細胞の調製を行い,現在までのところ,GalT-I欠損マウスより2系統,コントロールマウスより1系統の腫瘍細胞を単離した。GalT欠損マウス由来腫瘍細胞のin vitroでの倍加速度は,コントロールの約2倍であり,マウス皮膚での増殖速度を反映する結果が得られた。まだ例数が少ないので各々のマウスから10系統ぐらいの腫瘍細胞を単離して,増殖速度はもとより,フォーカスの形成能,軟寒天培地でのコロニー形成能,細胞外基質に対する接着能,ヌードマウスに移植した時の生着率や他の臓器への浸潤,転移能などを詳細に解析する予定である。また,マウス後肢に1mgのMCを投与して肉腫形成を誘導したり,胎仔由来の初代繊維芽細胞から株化細胞の樹立も進行しており,それらについてもGalT-I欠損の影響を解析する。

特征性聚糖结构在癌细胞的表面上发现，据说与细胞癌化，侵袭和转移有关。实际上，许多癌细胞特异性肿瘤抗原是糖缀合物抗原，也用于诊断为肿瘤标记。在这项研究中，我们使用了我们创建的GALT-I缺陷小鼠来阐明这些肿瘤抗原的作用，尤其是糖基化结构，例如siAllyl le^X，对细胞癌以及形成的肿瘤细胞的增殖，侵袭和转移。为此，我们使用化学致癌剂进行了致癌实验，并分离了肿瘤细胞系，并在今年分析了它们的特性。每周两次将0.5％的甲基胆碱（MC）应用于Galt-I同性缺陷的小鼠和异性缺陷小鼠的皮肤，并随着时间的推移观察到肿瘤形成。当观察到完成后长达140天后，在两只小鼠的60至100天中都观察到乳头状瘤样的肿瘤形成，并且在肿瘤的数量中均未观察到显着差异。然而，发现较少的GALT-I缺陷小鼠的肿瘤直径为10 mm或140天，而Galt-I缺陷小鼠的肿瘤往往的肿瘤趋于较慢。然后从这些肿瘤中制备细胞，迄今为止，从Galt-I缺陷型小鼠和一只对照小鼠中分离出两种肿瘤细胞。源自GALT缺陷小鼠的肿瘤细胞的体外加倍大约是对照的两倍，结果反映了小鼠皮肤的生长速率的结果。由于仍然很少有病例，因此将从每只小鼠中分离出约10个肿瘤细胞，并且将不仅要详细分析生长速率，而且还将被详细分析，而且还将在软琼脂培养基中形成焦点，菌落形成，对细胞外基质的粘附，当移植到裸小鼠中时，植入率，入侵其他器官和转移性。此外，向小鼠的后肢施用了1 mg的MC以诱导肉瘤的形成，并且还从胎儿的原发性成纤维细胞中建立了细胞谱系，还分析了Galt-I缺乏症的作用。