糖転移酵素遺伝子欠損マウスを用いた発癌・転移における糖鎖機能の解析

使用糖基转移酶基因缺陷小鼠分析致癌和转移中的聚糖功能

基本信息

批准号：
12215036
负责人：
浅野雅秀
金额：
$ 2.82万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12215036/
关键词：
糖転移酵素遺伝子腫瘍抗原シアリルLe^x メチルコラントレン

项目摘要

癌細胞の表面には特徴的な糖鎖構造が見い出されており,それらが細胞のがん化と浸潤,転移に関連していると言われている。実際,癌細胞特異的な腫瘍抗原の多くは糖鎖抗原であり,腫瘍マーカーとして診断にも利用されている。本研究では,我々が作製したGalT-I欠損マウスを用いて,これらの腫瘍抗原,特にシアリルLe^xなどの糖鎖構造が,細胞のがん化と形成された腫瘍細胞の増殖や浸潤,転移などの性質に与える影響を明らかにする。そのために,本年度は化学発がん剤による発がん実験及び腫瘍細胞株の単離とその性質の解析を行った。GalT-Iホモ欠損マウスとヘテロ欠損マウスの皮膚に0.5%メチルコラントレン(MC)を0.05mlずつ週2回計10回塗布し,経時的に腫瘍形成を観察した。塗布終了後140日後まで観察したところ,どちらのマウスにおいても60日から100日後ぐらいから乳頭腫様の腫瘍形成が認められ,腫瘍の数には有意な差は認められなかった。しかし140日後までに直径10mm以上の腫瘍を形成したマウスは,GalT-I欠損マウスの方が少なく,GalT-I欠損マウスでは腫瘍の増殖速度が遅い傾向が見られた。次にこれらの腫瘍から細胞の調製を行い,現在までのところ,GalT-I欠損マウスより2系統,コントロールマウスより1系統の腫瘍細胞を単離した。GalT欠損マウス由来腫瘍細胞のin vitroでの倍加速度は,コントロールの約2倍であり,マウス皮膚での増殖速度を反映する結果が得られた。まだ例数が少ないので各々のマウスから10系統ぐらいの腫瘍細胞を単離して,増殖速度はもとより,フォーカスの形成能,軟寒天培地でのコロニー形成能,細胞外基質に対する接着能,ヌードマウスに移植した時の生着率や他の臓器への浸潤,転移能などを詳細に解析する予定である。また,マウス後肢に1mgのMCを投与して肉腫形成を誘導したり,胎仔由来の初代繊維芽細胞から株化細胞の樹立も進行しており,それらについてもGalT-I欠損の影響を解析する。

在癌细胞表面发现了特征性糖链结构，据说这些结构与细胞癌变、侵袭和转移有关。事实上，许多癌细胞特异性的肿瘤抗原都是糖链抗原，它们也作为肿瘤标志物用于诊断。在这项研究中，我们使用我们创造的GalT-I缺陷小鼠来证明这些肿瘤抗原，尤其是唾液酸Le^x等糖链结构，负责形成的肿瘤细胞的细胞癌变、增殖和侵袭，并阐明了对转移等特性的影响。为此，今年我们利用化学致癌剂进行了致癌实验，分离了肿瘤细胞系，并分析了其特性。将0.05ml 0.5％甲基胆蒽(MC)涂抹在GalT-I纯合子小鼠和杂合子小鼠的皮肤上，每周两次，共10次，随时间观察肿瘤形成情况。施用结束后至140天观察时，约60至100天后，两只小鼠均观察到乳头状瘤样肿瘤形成，且肿瘤数量没有观察到显着差异。然而，140天后，GalT-I缺陷小鼠形成直径10毫米或更大的肿瘤的情况较少，而且GalT-I缺陷小鼠的肿瘤生长速度往往较慢。接下来，我们从这些肿瘤中制备了细胞，到目前为止，我们已经从 GalT-I 缺陷小鼠中分离出两株肿瘤细胞，从对照小鼠中分离出一株肿瘤细胞。来自 GalT 缺陷小鼠的肿瘤细胞的体外倍增率约为对照的两倍，这一结果反映了小鼠皮肤中的增殖率。由于病例数还较少，我们从每只小鼠中分离了约10系肿瘤细胞，并考察了它们的生长速度、病灶形成能力、在软琼脂培养基上的集落形成能力、细胞外基质的粘附能力以及裸露的粘附能力我们计划对移植后的存活率、对其他器官的侵袭以及转移潜力进行详细分析。此外，通过向小鼠后肢施用 1 mg MC 诱导肉瘤形成，并从胚胎来源的初级成纤维细胞建立细胞系，我们也将分析 GalT-I 缺陷对其的影响。