改良遺伝子トラップ法による新規発生制御遺伝子の単離と機能解析

使用改进的基因捕获方法分离和功能分析新型发育调控基因

基本信息

  • 批准号:
    14034218
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 4.35万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 财政年份:
    2002
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2002 至 2003
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

哺乳類の発生システムを理解するために、原腸陥入・中胚葉形成期に働く転写因子の下流に存在する発生制御遺伝子を、改良遺伝子トラップ法によって単離して、機能を解析することが本研究の目的である。Brachyury、HNF-3β、Pax1により発現調節されると考えられる遺伝子をトラップしたES細胞が4クローン得られたが、これまでに、Heterochromatin Protein(HP)1γとWilms' tumor 1-associating protein (WTAP)をトラップしたクローンより生殖系列キメラマウスが得られ、遺伝子変異マウスの作成に成功した。ヘテロ同士の交配を行ったところ、WTAPホモ変異マウスは胎生期に完全に致死であること、HP1γホモ変異マウスもごく一部生存するもののほとんどが胎生期に致死であることがわかり、改良遺伝子トラップ法により発生に必須の遺伝子が単離されてくることがわかった。トラップベクター内の発現マーカーであるLacZを用いて、それぞれの胚における発現パターンを調べた結果、HP1γは受精後5.5日より、WTAPは受精後3.5日より発現が検出でき、両遺伝子とも発生の非常に早い時期から発現が認められた。現在、死亡時期の同定と死亡原因の解明を行っているが、両遺伝子とも発生初期に重要な役割を担っている可能性が考えられる。今後、発生過程での発現パターンを詳細に明かにして、スクリーニングに用いたBrachyury、HNF-3β、Pax1によって、その発現が制御されているかどうかも明かにして行く予定である。
为了了解哺乳动物的发育系统,这项研究的目的是隔离出发育控制基因,这些基因呈现在胃肠道和中胚层形成阶段作用的转录因子的下游,并使用改进的基因捕获方法分析其功能。获得了四个ES细胞,这些细胞被认为是由Brachyury,HNF-3β和PAX1表达的,但到目前为止,从被捕获的杂染色质蛋白(HP)1γ和Wilms肿瘤1-Sosociating Protin(WTAP)的克隆中获得了种系嵌合小鼠,以及成功的Mutant of Mutant of Mutant of Mutant of Mutant of Mutant是成功的。当异质交叉时,发现在胎儿阶段,WTAP同型小鼠完全致死,并且大多数HP1γ同型杂种小鼠也活着,并且在胎儿阶段,大多数HP1γ同性恋小鼠都是致命的,并且在胎儿阶段都是致命的,并且是改善了基因捕获方法的基本基本基本的基本基础。使用LACZ(陷阱载体中的表达标记),我们研究了每个胚胎中的表达模式,发现可以从受精和WTAP后的5.5天检测到HP1γ,从受精后的3.5天可以检测到两个基因的表达,并且从很早的发育阶段就可以观察到两个基因的表达。目前,我们正在确定死亡的时机并澄清死亡原因,但是这两个基因在发展的早期阶段都可能起重要作用。将来,我们将详细揭示发育过程中的表达模式,并揭示表达是否受Brachyury,HNF-3β和用于筛选的PAX1的调节。

项目成果

期刊论文数量(11)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Wang, J. et al.: "The concerted activities of Pax4 and Nkx2.2 are essential to initiate pancreatic β-cell differentiation."Developmental Biology. 266. 178-189 (2004)
Wang, J. 等人:“Pax4 和 Nkx2.2 的协同活性对于启动胰腺 β 细胞分化至关重要。”发育生物学 266. 178-189 (2004)
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Kurohara, K. et al.: "Essential roles of Meltrin β (ADAM19) in heart development"Developmental Biology. 267. 14-28 (2004)
Kurohara, K. 等人:“Meltrin β (ADAM19) 在心脏发育中的重要作用”发育生物学。267. 14-28 (2004)
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Kurisaki, T. et al.: "Phenotypic analysis of Meltrin α (ADAM12) -deficient mice : Involvement of Meltrin α in adipogenesis and myogenesis."Molecular and Cellular Biology. 23. 55-61 (2003)
Kurisaki, T. 等人:“Meltrin α (ADAM12) 缺陷小鼠的表型分析:Meltrin α 参与脂肪生成和肌肉生成。”分子和细胞生物学 23. 55-61 (2003)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Yamamoto, S. et al.: "Mice deficient in nervous system-specific carbohydrate epitope HNK-1 exhibit impaired synaptic plasticity and spatial learning"Journal of Biological Chemistry. 277. 27227-27231 (2002)
Yamamoto, S. 等人:“缺乏神经系统特异性碳水化合物表位 HNK-1 的小鼠表现出突触可塑性和空间学习受损”《生物化学杂志》。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Nakae, S. et al.: "Antigen-specific T cell sensitization is impaired in IL-17-deficient mice, causing suppression of allergic cellular and humoral responses"Immunity. 17. 375-387 (2002)
Nakae, S. 等人:“IL-17 缺陷小鼠的抗原特异性 T 细胞致敏作用受损,导致过敏性细胞和体液反应受到抑制”免疫。
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  • 发表时间:
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知道了