ヒト1番染色体移入による不死化マウス肝細胞の老化再誘発

通过人类 1 号染色体转移重新诱导永生化小鼠肝细胞衰老

基本信息

批准号：
08670236
负责人：
李康弘
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Asahikawa Medical College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670236/
关键词：
肝細胞不死化抑制遺伝子マウス4番染色体ヒト1番染色体

项目摘要

C3Hマウス肝細胞由来の不死化細胞株Nは、第4染色体遠位部に存在する肝細胞不死化抑制遺伝子Lci(Liver cell immortalization)を欠損している。Lciの機能を明らかにする目的で、N細胞に第4染色体と相同性を有する正常ヒト第1染色体をマイクロセル法で移入したところ、移入クローンの出現頻度は極めて低く、対照として移入した第15染色体の場合に比べ、約30分の1であった。稀に出現した6個のクローンについて、移入されたヒト第1染色体の状態を調べると、全例で同染色体短腕に部分欠失が観察された。欠失マッピングによれば、最小共通欠失領域は1p35-36であった。この部位はマウス第4染色体遠位部と高い相同性を有することが知られており、ヒトLci遺伝子が同部位に存在するものと考えられた。肝プロモーターであるフェノバルビタール、あるいは、強力な外来性不死化遺伝子であるSV40T遺伝子の存在下でも、無傷のヒト第1染色体を保持する移入クローンは得られなかった。よって、Lciの不死化抑制作用は、不死化因子に関わらず、普遍的に発揮されるものと推測された。以上より、Lci遺伝子単離に不可欠であるYAC導入による不死化抑制機能のスクリーニング法を完成するためには、今年度とは異なる新しいアプローチが必要と思われる。一方、フェノバルビタールを用いる実験を行った際、この物質がc-myc遺伝子と協力してマウス肝細胞にアポトーシスを誘導することを発見した。我々の発見は、フェノバルビタールがアポトーシスの抑制により肝発癌を促進するという定説に疑問を投げかけるものである。現在、このアポトーシスの分子機構につき、解析を進めている。

The immortalized cell line N derived from C3H mouse hepatocytes is deficient in the liver cell immortalization gene Lci (Liver cell immortalization) that is located at the distal part of the chromosome 4. To clarify the function of Lci, when normal human chromosome 1, which has homology to chromosome 4, was transferred to N cells using the microcell method, the frequency of the incorporation clones appeared was极低，大约三分之一的染色体染色体病例作为对照。当检查了六个稀有克隆中转染的人类染色体1的状态时，在所有情况下，在同壳的短臂中都会观察到部分缺失。根据删除映射，最小常见的缺失区域为135-36。众所周知，该部位与小鼠4染色体的远端具有很高的同源性，并且人们认为人LCI基因存在于同一部位。在存在肝启动子苯巴比妥或SV40T基因（一种强大的外源永生基因的基因）的情况下，NO不得产生不带携带完整人类染色体1的转染克隆。因此，人们推测LCI永生化的抑制作用是普遍施加的。基于上述内容，似乎与今年不同的新方法是通过引入YAC来筛选永生化抑制函数的方法，这对于分离LCI基因至关重要。另一方面，当进行了使用苯巴比妥的实验时，我们发现该物质与C-MYC基因合作以诱导小鼠肝细胞凋亡。我们的发现提出了关于苯巴比妥通过抑制凋亡促进肝癌发生的普遍看法的问题。目前，我们正在对凋亡的分子机理进行分析。