自己免疫疾患の病態に関わる胸腺ニッチ構築シグナルの解明

阐明与自身免疫性疾病病理相关的胸腺生态位构建信号

基本信息

批准号：
18060030
负责人：
松本満
金额：
$ 3.07万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

AIRE遺伝子の発現制御下に蛍光分子マーカーGFPを発現するAIRE/GFPノツクインマウス(AIRE/GFP-KI)を作製した。その結果予測通り、AIRE/GFP-KI胸腺の組織切片を抗GFP抗体と抗AIRE抗体によって二重染色したところ、ほとんど全てのGFP陽性細胞はAIRE陽性であった。興味深いことに、AIRE遺伝子をホモで欠損する個体(gfp/gfp)の胸腺でもGFP陽性細胞が同程度に認められ、このことからAIRE自体はAIREを発現する胸腺髄質上皮細胞(mTEC)の系列決定に関与しないことが明らかになった。次いで、AIRE/GFP-KI (+/gfp)およびAIRE/GFP-KI (gfp/gfp)のAIRE発現細胞およびAIRE非発現細胞の各分画をソーティングし、insulin 2およびCRP即の発現をreal-time PCRを用いて解析した。その結果、AIRE-dependent TSA geneであるinsulin2の発現はもっぱらAIRE発現細胞から正常AIRE蛋白質の存在に依存して認められるのに対し、AIRE-independent TSA geneであるCRPの発現はAIRE発現細胞とAIRE非発現細胞の両方から、正常AIRE蛋白質の有無に関わらず検出された。AIREは終末分化段階にあるmTECで発現しているという最近の報告とも併せ、mTECにおけるTSA発現機構として、terminal differentiation model を支持する結果であった。他方、免疫祖織染色からはAIRE/GFP-KI (gfp/gfp)のAIRE発現細胞は形態変化と分布異常を認めたことから、AIREがmTECの細胞構築化に対しても重要なはたらきを持つことが明らかになった。

我们生成了 AIRE/GFP 敲入小鼠 (AIRE/GFP-KI)，它们在 AIRE 基因的控制下表达荧光分子标记 GFP。正如预期的那样，当 AIRE/GFP-KI 胸腺组织切片用抗 GFP 和抗 AIRE 抗体双重染色时，几乎所有 GFP 阳性细胞均为 AIRE 阳性。有趣的是，在纯合子和 AIRE 基因 (gfp/gfp) 缺陷个体的胸腺中观察到类似数量的 GFP 阳性细胞，表明 AIRE 本身决定了表达 AIRE It 的胸腺髓质上皮细胞 (mTEC) 的谱系。已经明确表示他不会参与其中。接下来，我们对 AIRE/GFP-KI (+/gfp) 和 AIRE/GFP-KI (gfp/gfp) 的表达 AIRE 和不表达 AIRE 的细胞部分进行分类，并测定胰岛素 2 和 CRP 在真实-使用时间PCR进行分析。结果，依赖于正常 AIRE 蛋白的存在，仅在表达 AIRE 的细胞中观察到胰岛素 2（一种 AIRE 依赖性 TSA 基因）的表达，而仅在表达 AIRE 的细胞中观察到 CRP（一种不依赖于 AIRE 的 TSA 基因）的表达。无论正常 AIRE 蛋白是否存在，在表达 AIRE 的细胞和非表达细胞中均检测到。结合最近AIRE在mTECs终末分化阶段表达的报道，这些结果支持终末分化模型作为mTECs中TSA表达的机制。另一方面，免疫组织化学染色显示AIRE/GFP-KI（gfp/gfp）表达AIRE的细胞出现形态学改变和异常分布，表明AIRE在mTEC细胞组装中也发挥着重要作用。