自己抗原のプロセッシング障害による自己寛容破綻病態の解明

阐明由于自身抗原加工障碍导致的自我耐受破坏的病理学

基本信息

批准号：
17047028
负责人：
松本満
金额：
$ 5.95万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17047028/
关键词：
自己免疫疾患 AIRE 胸腺上皮細胞 MHC プロテオミクスノックアウトマウス

项目摘要

胸腺上皮細胞によって提示される自己抗原には、1)class Iに提示される細胞内の内在性自己抗原と、2)循環血流に乗って胸腺に入り、胸腺上皮細胞によって細胞内に取り込まれた後、ペプチドへのプロセッシングを経てclass IIと結合した形で細胞表面に提示される自己抗原の2種類が存在する。本研究では、AIRE欠損(あるいは変異)にともなう胸腺上皮細胞上に提示される自己抗原の質的な変化をclass I、class II経路の両者について検討する。すなわち、class II経路については、野生型および疾患変異体(E3 ligase欠損変異)のAIRE遺伝子を導入した胸腺上皮細胞株からclass II結合ペプチドを溶出し、プロテオミクスの手法を用いて、そのプロファイリングを作成・比較し、AIREによる自己抗原ペプチド創出機構の存在を明らかにすべく、細胞の大量培養と抗class II抗体を用いた免疫沈降実験を開始している。他方、class I経路を介した内在性自己抗原の表出に対するAIREの効果については、WT1(Wilms' tumor)を自己抗原として細胞表面に表出するヒト肺癌細胞株(LK79:HLA-A24陽性)を用いるべく、準備を進めている。すなわち、野生型および疾患変異体AIREを発現するLK79細胞株を樹立し、AIRE依存的な細胞表面でのWT1発現状態をHLA-A24拘束性WT1特異的CD8陽性T細胞株への反応性によって評価する。さらに、これらの細胞株について、AIREに依存した自己抗原表出変化のメカニズムを細胞膜分画の2次元電気泳動(differential analysis)によって明らかにすべく、泳動条件の検討を開始している。以上の研究の進展により、AIRE依存性に胸腺上皮細胞上で変動する蛋白が同定できれば、自己免疫疾患発症機構の解明に有力な手がかりとなるのみならず、自己寛容の成立機構の本態に迫ることができる。

胸腺上皮细胞呈递的自身抗原包括1)以I类形式呈递的细胞内内源性自身抗原；和2)通过循环血流进入胸腺并被胸腺上皮细胞摄入细胞内的自身抗原。然后将自身抗原加工成肽并以 II 类键的形式呈现在细胞表面。在本研究中，我们将检查由于 I 类和 II 类途径中 AIRE 缺陷（或突变）导致胸腺上皮细胞上呈现的自身抗原的质变。具体而言，对于II类途径，从导入AIRE基因的野生型和疾病突变体（E3连接酶缺陷突变体）胸腺上皮细胞系中洗脱II类结合肽，并使用蛋白质组学技术创建它们的谱・为了比较并明确AIRE的自身抗原肽生成机制的存在，我们开始了细胞的大量培养和使用抗II类抗体的免疫沉淀实验。另一方面，关于AIRE通过I类途径对内源性自身抗原表达的影响，表达WT1（维尔姆斯肿瘤）的人肺癌细胞系（LK79：HLA-A24阳性）作为自身抗原正在研究细胞表面上的抗原。具体来说，我们建立了表达野生型和疾病突变体 AIRE 的 LK79 细胞系，并通过与 HLA-A24 限制性 WT1 特异性 CD8 阳性 T 细胞系的反应性评估了 AIRE 依赖性细胞表面 WT1 表达状态。此外，我们已经开始研究这些细胞系的电泳条件，以便通过细胞膜组分的二维电泳（差异分析）阐明自身抗原表达中 AIRE 依赖性变化的机制。如果通过上述研究进展，我们能够鉴定出一种在胸腺上皮细胞上以AIRE依赖性方式波动的蛋白，不仅将为阐明自身免疫性疾病的发病机制提供有力的线索，也有助于我们研究自身免疫性疾病的发生机制。追根溯源，建立自我宽容机制是可以做到的。