ミトコンドリア膜透過性亢進機構を標的とした抗アポトーシス薬の開発

针对线粒体膜通透性机制的抗凋亡药物的开发

基本信息

批准号：
16023240
负责人：
清水重臣
金额：
$ 3.97万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16023240/
关键词：
アポトーシスミトコンドリア Bcl-2

项目摘要

アポトーシスが実行される際に、ミトコンドリアの膜透過性亢進に伴うシトクロムc漏出は必須の現象であることが多い。我々は、この現象を単離ミトコンドリアにより再現するin vitro assay系を有している。この系にミトコンドリア外膜に対するモノクローナル抗体ライブラリーや低分子化合物を投与し、シトクロムc漏出を緩和する抗体あるいは低分子化合物を同定を行なった。即ち、1)ミトコンドリア外膜に対するモノクローナル抗体のライブラリー(4000クローン)を作製した後、これらを単離ミトコンドリアによるin vitro assay系に前投与し、シトクロムc漏出を抑制または促進する抗体を選別した。また、これらの抗体を細胞にマイクロインジェクションし、アポトーシスに対する抵抗性または感受性を確認した。2)また、単離ミトコンドリアを用いたin vitro assay系に種々の低分子化合物を前投与し、シトクロムc漏出を抑制する化合物を複数選別した。さらに、これらの化合物の標的蛋白質(ミトコンドリア膜蛋白質)を同定した。このうち、一つはPhosphatidylcholine-phospholipaseC(PC-PLC)を標的蛋白質としていた。3)Bcl-2ファミリー蛋白質の立体構造解析をもとに、活性中心に反応する低分子化合物の同定も試みた。いくつかの化合物は、コンピューターシミュレーション上は反応可能であると考えられたが、実際の生理活性は確認されなかった。`

当进行凋亡时，与线粒体膜通透性增加有关的细胞色素C泄漏通常是必不可少的现象。我们有一个体外测定系统，通过分离的线粒体复制这种现象。该系统是对线粒体外膜的单克隆抗体库或小分子化合物的施用，并鉴定了减轻细胞色素c泄漏的抗体或小分子化合物。也就是说，1）在准备针对线粒体外膜（4000克隆）的单克隆抗体库后，选择了这些抗体，这些抗体被隔离的线粒体和抑制或促进细胞直接渗漏的抗体预先应用于体外测定系统。这些抗体还会显微注射到细胞中，以确认对凋亡的抗药性或敏感性。 2）使用分离的线粒体将各种小分子化合物预先授予体外测定系统，并选择了许多抑制细胞色素C泄漏的化合物。此外，鉴定了这些化合物的靶蛋白（线粒体膜蛋白）。其中之一是磷脂酰胆碱 - 磷脂（PC-PLC）作为靶蛋白。 3）基于Bcl-2家族蛋白的三维结构分析，我们还试图鉴定与活性中心反应的小分子化合物。一些化合物在计算机模拟中被认为是反应性的，但是没有证实实际的生理活性。 `