アポトーシスを可視化するマウスの開発とその応用

细胞凋亡可视化小鼠的研制及其应用

基本信息

批准号：
21659076
负责人：
清水重臣
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659076/
关键词：
アポトーシスミトコンドリアカスペース Smac Bc1-2 蛋白質スプライシング

项目摘要

生体において、アポトーシスは生理学的,病理学的に極めて重要な役割を担っていると考えられている。しかしながら、生体内において、アポトーシスがいつ、どのような臓器で、どのような生理機能に関わっているか,疾患のどの場面で細胞死が関与しているかは、充分には解明されていない。我々は、このような課題を克服し、生体におけるアポトーシスの意義をより明確にする為に、アポトーシスをモニターできるマウスを作製し、種々の遺伝子改変マウスとの交配を行った。具体的には、まず、(1)アポトーシス実行に不可欠の現象である「ミトコンドリアの膜透過性亢進」を時空間的に定量評価できるマウス、(2)アポトーシス実行に直接関わる蛋白質分解酵素カスペースの活性化をモニターできるマウス、の2種類を作成した。前者は、ミトコンドリア膜を赤色蛍光でラベルし、膜間腔に存在するSmac蛋白質に緑色蛍光を付加したマウスで、赤色と緑色の解離によって膜透過性変化がモニターできる。後者は、split GFPを用いてカスペース活性を定量評価できるマウスである。後者に関しては,蛍光蛋白質が充分には発現せず、モニターマウスとしては充分ではなかった。一方、ミトコンドリア膜透過性をモニターするマウスに関しては、(1)マウス由来の線維芽細胞にアポトーシス刺激を加えると、刺激の多寡に応じて蛍光活性が認められる事、(2)アポトーシス抑制分子であるBc1-2を過剰発現したマウスと交配すると、蛍光活性が認められなくなる事、の2点より、アポトーシスモニターマウスとして有用である事が示された。さらに、このマウスを用いて、発生期にアポトーシスが生じている部位を観察したところ、指間の細胞や胸腺細胞においてアポトーシスが生じている事が明らかとなった。

在生物体中，凋亡被认为起着极为重要的生理和病理作用。但是，在体内涉及哪些器官，哪些生理功能凋亡以及其中涉及疾病细胞死亡的场景时，尚不完全了解什么。为了克服这些挑战并阐明生物体中凋亡的重要性，我们创建了可以监测凋亡的小鼠，并与各种遗传改性的小鼠配合。具体而言，我们首先创建了两种类型：（1）可以定量评估``线粒体通透性的过度性''''的小鼠，这是一种时空方式的凋亡的一种基本现象，以及可以监测蛋白质溶酶体的激活的小鼠，该小鼠可以监测直接涉及的蛋白酶糖浆caspace的激活。前者是小鼠，其中将线粒体膜用红色荧光灯标记，并将绿色荧光添加到膜间空间中存在的SMAC蛋白中，并且可以通过红色和绿色的解离来监测膜的渗透率变化。后者是一种小鼠，可以使用分裂GFP定量评估CASPACE活性。关于后者，荧光蛋白没有完全表达，也不足以用于监测小鼠。另一方面，已显示出监测线粒体膜渗透性的小鼠可作为凋亡监测小鼠有用未观察到荧光活性。此外，当我们观察到使用该小鼠在新生期间发生凋亡的部位时，据揭示了凋亡发生在手指和胸腺细胞之间的细胞中。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

The role of Cyclophilin D in learning and memory

DOI：
10.1002/hipo.20625
发表时间：
2009-05
期刊：
Hippocampus
影响因子：
3.5
作者：
A. Mouri;Y. Noda;S. Shimizu;Y. Tsujimoto;T. Nabeshima
通讯作者：
A. Mouri;Y. Noda;S. Shimizu;Y. Tsujimoto;T. Nabeshima

Multiple mechanisms of cell death and their regulation by mitochondria

细胞死亡的多种机制及其线粒体的调节

DOI：
发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
0
作者：
大島浩子;大島正伸;S.Shimizu
通讯作者：
S.Shimizu

Delayed-Onset Caspase-Dependent Massive Hepatocyte Apoptosis upon Fas Activation in Bak/Bax-Deficient Mice

DOI：
10.1002/hep.24305
发表时间：
2011-07-01
期刊：
HEPATOLOGY
影响因子：
13.5
作者：
Hikita, Hayato;Takehara, Tetsuo;Hayashi, Norio
通讯作者：
Hayashi, Norio

xCT deficiency accelerates chemically induced tumorigenesis

DOI：
10.1073/pnas.0912827107
发表时间：
2010-04-06
期刊：
PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
影响因子：
11.1
作者：
Nabeyama, Ami;Kurita, Ai;Tanaka, Masato
通讯作者：
Tanaka, Masato

Discovery of AtgS/Atg7-independent alternative macroautophagy

不依赖 AtgS/Atg7 的替代性巨自噬的发现