造血幹細胞の増幅・維持の分子機構とその制御シグナル伝達分子

造血干细胞扩增维持的分子机制及其调控信号转导分子

基本信息

批准号：
15039208
负责人：
高木智
金额：
$ 2.69万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

1、造血幹細胞の増幅に関与するLnk依存性制御系の標的受容体及び標的遺伝子群の同定Lnk欠損マウス骨髄では、CD34-cKit+Sca1+Lin-細胞、Hoechst染色によって識別されるSP細胞が著しく増加するとともに機能的な骨髄造血幹細胞の顕著な増加が生じていることを示した。一部の造血幹細胞においては細胞あたりの造血系再構築能も亢進していることを個々の造血幹細胞の競合的骨髄再構築能を個別に検討することにより明らかにした。2、Lnkの機能阻害分子による造血幹細胞制御法の検討Lnk依存性制御機構をコントロールすることで造血幹細胞の造血能を向上させ骨髄移植に伴うリスクの軽減を目指して、Lnk阻害分子を開発しその効果を骨髄移植モデルを用いて検証した。Lnkの各部位にアミノ酸置換変異や欠失変異を導入して作製した種々のLnk変異体をc-Kit依存性に増殖する細胞株に発現させた。Lnkによる増殖抑制にはSH2ドメインが必須であり、LnkSH2変異体はドミナントネガティブ(DN)変異体として機能することがわかった。SH2変異に加えてPHドメイン欠損とC末端領域欠損を組み合わせると、より効果的に野生型Lnkの機能を阻害することがわかった。得られたDN-Lnk変異体をレトロウィルスベクターによりマウス造血前駆細胞に感染導入した後、放射線照射したマウスへ移植した。DN-Lnk変異体導入細胞を移植した群では、コントロール細胞移植群に比しGFP陽性血球細胞の割合が明らかに増加しており、DN-Lnk変異体を導入した前駆細胞の造血能亢進が観察された。さらに、DN-Lnk変異体のプラスミドDNAによる一過性発現によっても造血前駆細胞の生着能が亢進することがわかった。

1。鉴定LNK依赖性调节系统的靶基因和靶基因组，参与LNK缺陷小鼠骨髓，CD34-CKIT+SCA1+LIN-CELL和SP细胞中通过HOECHST鉴定的HOECHST鉴定的SP细胞显着增加，并显着增加，并且在功能上增加了功能型肌动型肌动型，这与HOECHST识别出显着增加了。通过检查单个造血干细胞每个细胞重建造血系统的竞争能力，我们透露，通过对重建骨髓的竞争能力进行个人检查，还可以提高重建每个细胞造血系统的能力。 2。使用LNK功能抑制分子检查造血干细胞的控制方法，以通过控制LNK依赖性调节机制来提高造血干细胞的造血能力，并降低与骨骨髓抑制剂移植物的骨骼抑制剂及其效应的骨骼模型。通过引入氨基酸取代突变和在LNK的每个位点引入氨基酸取代突变和缺失突变产生的各种LNK突变体在以C-KIT依赖性方式增殖的细胞系中表达。 SH2结构域对于LNK诱导的生长抑制至关重要，发现LNKSH2突变体是主要的负（DN）突变体。已经发现，除了SH2突变外，将pH结构域缺乏与C末端区域缺陷相结合，可以更有效地抑制野生型LNK的功能。将所得的DN-LNK突变体感染，并使用逆转录病毒载体引入小鼠造血祖细胞中，然后植入被辐射照射的小鼠。在用DN-LNK突变体转导的细胞移植细胞的组中，与对照细胞转移组相比，GFP阳性血细胞的比例明显增加，并且观察到用DN-LNK突变体转染的祖细胞的造血活性。此外，还发现质粒DNA对DN-LNK突变体的瞬时表达增强了造血祖细胞的植入。