プレB細胞受容体シグナルの新規標的転写因子群とその機能

前B细胞受体信号的新型靶转录因子及其功能

基本信息

批准号：
20060038
负责人：
高木智
金额：
$ 6.08万
依托单位：
Research Institute, International Medical Center of Japan
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

B細胞は様々な外来抗原に対して特異的抗体を産生し生体防御に貢献する。プレB細胞受容体からのシグナルはB細胞分化に必須であるが、下流の標的遺伝子群およびそれらの機能については未解決である。RAG2欠損B前駆細胞の分化誘導モデル系を用いた遺伝子発現解析から、Btk依存的に制御される転写因子HeyL及びMafBを同定した。これらのB細胞初期分化における役割やB細胞レパトア形成における役割について検討した。前年度までにHeyL過剰発現によりB細胞系への分化やB細胞産生が亢進することを示した。本年度は、HeyLが持つDNA結合bHLHドメイン、Orangeドメイン、C末端部位の欠損変異体を作製し、機能ドメインを同定した。DNA結合bHLHドメインはB細胞分化及び増殖のどちらにも必須であること、C末端部位の欠損は増殖誘導を障害しむしろ分化を促進することがわかった。HeyL遺伝子のエクソンをGFP遺伝子に置き換えたターゲティングベクターを作成し、常法によりキメラマウスを得てHeyL欠損マウスを作成した。HeyL発現をGFPでモニターすることを試みるとともに、HeyL欠損マウスにおけるB細胞分化、液性免疫応答の解析を始めた。MafB遺伝子をGFPと置き換えた遺伝子改変マウス(Takahashi S et al. MCB, 2006)を入手した。このマウスは新生児期に無呼吸により死亡する。胎児肝よりプロB細胞株を樹立し、MafB欠損によるB細胞分化への影響を解析した。MafBはプロB細胞の一部に比較的強く発現し、その欠損で増殖が亢進する可能性が示された。

B 细胞产生针对各种外来抗原的特异性抗体并有助于生物防御。来自前 B 细胞受体的信号对于 B 细胞分化至关重要，但下游靶基因及其功能仍未解决。通过使用 RAG2 缺陷 B 祖细胞的分化诱导模型系统进行基因表达分析，我们鉴定了以 Btk 依赖性方式调节的转录因子 HeyL 和 MafB。我们研究了它们在早期 B 细胞分化和 B 细胞库形成中的作用。去年，我们发现 HeyL 的过度表达可增强 B 细胞分化和 B 细胞生成。今年，我们创建了缺乏 DNA 结合 bHLH 结构域、Orange 结构域和 HeyL C 端区域的突变体，并鉴定了功能域。我们发现 DNA 结合 bHLH 结构域对于 B 细胞分化和增殖至关重要，并且 C 末端区域的缺失会损害增殖诱导，但会促进分化。创建了一个靶向载体，其中 HeyL 基因的外显子被 GFP 基因取代，并使用标准方法获得嵌合小鼠，以创建 HeyL 缺陷小鼠。除了尝试使用 GFP 监测 HeyL 表达外，我们还开始分析 HeyL 缺陷小鼠的 B 细胞分化和体液免疫反应。我们获得了转基因小鼠，其中 MafB 基因被 GFP 取代（Takahashi S 等人 MCB，2006）。这只小鼠在新生儿期死于呼吸暂停。我们从胎儿肝脏建立了前 B 细胞系，并分析了 MafB 缺陷对 B 细胞分化的影响。 MafB 在部分 pro-B 细胞中表达相对较强，其缺陷可能导致增殖增加。