リンパ球の初期分化を誘導・制御するシグナル伝達機構

诱导和控制淋巴细胞早期分化的信号转导机制

基本信息

批准号：
12051243
负责人：
烏山一
金额：
$ 105.92万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)プロB細胞よりクローニングしたTPP36とそのアイソフォームであるTPP32がともにチロシンキナーゼAb1によって効率よくチロシンリン酸化されること、しかも120番目チロシン残基のリン酸化によって立体構造変化がひきおこされることが判明した。両分子ともN末端近傍に典型的な核移行シグナル配列をもつが、核ではなく細胞質に局在しており、リン酸化にともなう核移行の可能性が示唆された。(2)我々は以前、BtkのSH3ドメインに結合し、Btkの活性を抑制する新規分子Sab (SH3BP5)を同定したが、今回はSabがミトコンドリア内に局在し、活性型のJNKと会合し、さらにJNKによってリン酸化される事を示した。これらのことにより、B細胞のアポトーシスに機能すると考えられるBtkとJNKの両分子のクロストークにおけるSabの介在の可能性を示した。(3)TCRγ遺伝子座において、サイトカイン非刺激下では調節領域のヒストンH3Lys9がメチル化されていたが、刺激後数日間で徐々に低下し、代わりにアセチル化レベルが上昇した。この時、Jγ領域のgermline転写とクロマチンのaccessibilityも同様に上昇した。以上の結果からTCRγ遺伝子座のクロマチンの閉じた状態とヒストンH3Lys9のメチル化が良く相関することが示された。(4)マクロファージおよび未熟樹状細胞に発現する新規抑制性レセプターLy49Qの性状解析を行った。Ly49Qは細胞内ITIMのリン酸化依存的にSHP-2を会合した。マクロファージおよびプラスマ細胞様樹状細胞は抗Ly49Q抗体処理により速やかに接着伸展し、極性を形成した。さらにLy49Qの過剰発現によって、細胞接着が抑制されたことから、Ly49Qはこれらの細胞で細胞接着能の制御に関与することが示唆された。

(1)从pro-B细胞克隆的TPP36及其异构体TPP32都被酪氨酸激酶Ab1有效地磷酸化，而且，第120个酪氨酸残基的磷酸化引起构象变化。尽管这两种分子在其 N 末端附近都有典型的核输出信号序列，但它们位于细胞质而不是细胞核中，这表明磷酸化后核输入的可能性。（2）我们之前发现了一种新的分子Sab（SH3BP5），它与Btk的SH3结构域结合并抑制Btk活性，但这一次，我们发现Sab定位于线粒体内并与活性JNK相关，并进一步表明它与Btk的SH3结构域结合。被 JNK 磷酸化。这些结果证明了 Sab 可能介导 Btk 和 JNK 之间的串扰，这被认为在 B 细胞凋亡中发挥作用。 (3)在TCRγ基因位点，调控区的组蛋白H3Lys9在没有细胞因子刺激的情况下甲基化，但在刺激后几天内逐渐减少，乙酰化水平反而升高。此时，Jγ区域的种系转录和染色质可及性也增加。上述结果表明TCRγ基因位点染色质的闭合状态与组蛋白H3Lys9的甲基化有很好的相关性。 (4)我们表征了巨噬细胞和未成熟树突状细胞中表达的新型抑制性受体Ly49Q。 Ly49Q 以细胞内 ITIM 磷酸化依赖性方式与 SHP-2 相关。用抗 Ly49Q 抗体处理后，巨噬细胞和浆细胞样树突状细胞迅速形成粘附并形成极性。此外，Ly49Q 的过度表达抑制细胞粘附，表明 Ly49Q 参与调节这些细胞中的细胞粘附。