Regulation of anti-fungal immunity by adaptor protein 3BP2

接头蛋白3BP2对抗真菌免疫的调节

基本信息

批准号：
22K06897
负责人：
千原一泰
金额：
$ 2.66万
依托单位：
University of Fukui
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06897/
关键词：
3BP2 C型レクチン受容体チロシンリン酸化 CARD9 NF-κB Syk NF-kappa B 免疫応答

项目摘要

最近我々は、真菌免疫応答を誘導するC型レクチン受容体を介したサイトカインの産生にアダプター蛋白質3BP2が重要な役割を担う事を明らかにした。本研究ではそのメカニズムを明らかにする目的でプロテオーム解析を行い、3BP2と会合する標的分子の同定を計画している。今年度は予備実験として、既知の3BP2会合分子がC型レクチン受容体を介するシグナル伝達にどの様な影響を与えるのか解析した。これまでに我々は、293T細胞にC型レクチン受容体dectin-1およびCARD9を3BP2と共発現させると、カードランに反応してNF-κBの活性化が見られる実験系を構築している。この実験系において、3BP2に会合するVav1およびVav2のドミナントアクティブ変異体を共発現させるとNF-κBの活性化が増強され、Vav2およびVav3のドミナントネガティブ変異体を共発現させるとNF-κBの活性化は抑制された。また、3BP2の過剰発現により、Vav2のチロシンリン酸化が誘導されることを見出した。一方、3BP2と会合する報告は無いが、CARD9の活性化に重要な役割を果たすPKC deltaのドミナントアクティブ変異体を共発現させると、NF-κBの活性化が著しく増強された。しかし、PKC deltaのドミナントネガティブ変異体はNF-κBの活性化に影響を及ぼさなかった。以上より、3BP2はVav2を介してCARD9を活性化し、NF-κBの活性化を調節すると考えられた。Vav2の活性化にはチロシンリン酸化が必要と考えられている。3BP2は未同定のチロシンキナーゼを活性化し、Vav2のチロシンリン酸化を促進する可能性が示唆された。現在、3BP2により活性化されるチロシンキナーゼの同定を進めている。

最近，我们发现衔接蛋白 3BP2 在通过 C 型凝集素受体产生细胞因子以诱导真菌免疫反应中发挥着重要作用。在本研究中，我们计划进行蛋白质组分析，以阐明其机制并鉴定与 3BP2 相关的靶分子。今年，作为初步实验，我们分析了已知的 3BP2 相关分子如何通过 C 型凝集素受体影响信号转导。迄今为止，我们已经构建了一个实验系统，其中当 C 型凝集素受体 dectin-1 和 CARD9 与 3BP2 在 293T 细胞中共表达时，观察到 NF-κB 激活响应凝胶多糖。在该实验系统中，与 3BP2 相关的 Vav1 和 Vav2 显性活性突变体的共表达增强了 NF-κB 的激活，而 Vav2 和 Vav3 的显性失活突变体的共表达增强了 NF-κB 的激活。我们还发现3BP2的过度表达诱导Vav2的酪氨酸磷酸化。另一方面，虽然没有报道表明它与 3BP2 相关，但在 CARD9 激活中起重要作用的 PKC δ 显性活性突变体的共表达显着增强了 NF-κB 的激活。然而，PKC δ 的显性失活突变体对 NF-κB 激活没有影响。基于上述，3BP2被认为通过Vav2激活CARD9并调节NF-κB激活。酪氨酸磷酸化被认为是 Vav2 激活所必需的。有人认为3BP2可能激活一种未鉴定的酪氨酸激酶并促进Vav2的酪氨酸磷酸化。我们目前正在鉴定由 3BP2 激活的酪氨酸激酶。