チロシンホスファターゼSHP-2の結合基質蛋白質SHPS-1に関する研究

酪氨酸磷酸酶SHP-2结合底物蛋白SHPS-1的研究

基本信息

批准号：
09254240
负责人：
的崎尚
金额：
$ 3.01万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09254240/
关键词：
チロシンホスファターゼ SHP-2 SHPS-1 Ras インテグリン LPA インスリン

项目摘要

私達は、昨年度、チロシンホスファターゼSHP-2の脱チロシンリン酸化基質蛋白質、SHPS-1の遺伝子クローニングに成功した。SHPS-1は、分子量120kDaの受容体型の糖化膜蛋白質で、複数の免疫グロブリン様構造を細胞外部分に、4個のYXXL/V/Iチロシンリン酸化モチーフを細胞内部分に有している。そこで、本研究計画においては、さらにSHPS-1の生理作用を明らかにしようと試みた。野性型および、チロシンリン酸化部位を欠損させた様々な変異型SHPS-1cDNAを、CHO-IR細胞に発見させ、インスリン刺激によるSHPS-1のチロシンリン酸化とSHP-2の結合を検討した。その結果、SHPS-1のTyr449とTyr473がチロシンリン酸化部位であることが明らかとなった。さらに、野性型SHPS-1の過剰発現により、インスリンによるMAPキナーゼの活性化が、SHPS-1SHP-2複合体の形成の増加に伴い、有意に増強された。インテグリンを介したSHPS-1のチロシンリン酸化は、FAKやSRCキナーゼを欠損する細胞においてはほとんど認められなかった。LPAによるSHPS-1のチロシンリン酸化は、ボツリヌスC3酵素の処理で、ほぼ完全に抑制されRhoの関与が示唆された。免疫グロブリンFc領域との融合蛋白質としてSHPS-1の細胞外ドメインを大量に発現、精製した。これを探子として用いたところ、ラット大脳皮質神経細胞に特異的な結合を認め、現在発現cDNAライブラリーよりSHPS-1のリガンド遺伝子をクローニング中である。本研究により、インスリン、LPA、インテグリンを介した細胞接着刺激によりSHPS-1がチロシンリン酸化を受け、SHPS-1SHP-2複合体が形成され、Rsa-MAPキナーゼの活性化に関与している可能性が示唆された。インスリン受容体キナーゼによって、SHPS-1は直接チロシンリン酸化されるが、イテグリンによるSHPS-1のチロシンリン酸化には、FAK、SRCキナーゼが、重要であり、また、LPAによるSHPS-1のチロシンリン酸化には、Rhoが関与するようで、リガンド刺激によりSHPS-1のチロシンリン酸化の機序も異なるようである。今後さらに、SHPS-1SHP-2複合体によるRas活性化機序の詳細に関し研究を行う予定である。SHPS-1の細胞外ドメインに対する結合分子の遺伝子クローニングについても来年度可能になると考えている。

去年，我们成功地克隆了SHPS-1，SHPS-1，SHPS-1，酪氨酸蛋白酶蛋白SHP-2的酪氨酸氧化物蛋白。 SHPS-1是一种糖蛋白，分子量为120kDa，在细胞外部有多个免疫球蛋白结构，并且细胞中的四个YXXL/V/I酪氨酸氧化物。因此，在本研究计划中，我们试图进一步阐明SHPS-1生理影响。 Cho-ir细胞发现了各种突变体SHPS-1CDNA，它们在野生和氧化酪氨酸中缺乏缺陷，并检查了SHPS-1酪氨酸-IN氧化和SHP-2的结合通过胰岛素刺激的结合。结果，据揭示了SHPS-1的Tyr449和Tyr473是酪氨酸氧化位点。此外，随着SHPS-1SHP-2复合物的形成增加，野生型SHPS-1的过表达显着增强了MAP激酶的激活。 SHPS-1通过整合素的酪氨酸氧化很少在FAK和SRC激酶缺乏的细胞中被识别。 LPA的SHPS-1酪氨酸氧化几乎被肉毒杆菌C3酶的处理几乎完全抑制，并建议参与RHO。作为具有免疫球蛋白FC区域的融合蛋白，表达并纯化了大量的SHPS-1细胞外域。当将其用作探索时，在大鼠脑皮质神经细胞中观察到了特定的键，并且SHPS-1的配体基因目前正在表达cDNA文库中。在这项研究中，SHPS-1是由细胞粘附刺激引起的酪氨酸氧化引起的，可以通过胰岛素，LPA和完整性刺激，并且可能形成SHPS-1SHP-2复合物，并且可能参与RSA-MAP的振兴激酶被建议。 SHPS-1被胰岛素受体激酶直接氧化，但是对于Iteglin，FAK和SRC激酶对SHPS-1的酪氨酸氧化很重要，LPA的SHPS-1酪氨酸很重要参与氧化，SHPS-1酪氨酸氧化的机理似乎取决于配体刺激。将来，我们计划研究SHPS-1SHP-2复合物的RAS振兴机制的细节。我们认为，明年将有可能将结合分子与SHPS-1的细胞外结构域的遗传克隆。