Ras活性化機構におけるチロシンホスファターゼの機能に関する研究

酪氨酸磷酸酶在Ras激活机制中的作用研究

基本信息

批准号：
08265240
负责人：
的崎尚
金额：
$ 2.94万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08265240/
关键词：
チロシンホスファターゼ Ras 増殖因子 SHP-2 SHPS-1

项目摘要

私達は、src-homology2領域(SH2 domain)を有するPTPaseであるSAP-2が、インスリン刺激によるRasの活性化に決定的な役割を果たしていることを見い出し、SAP-2が増殖因子刺激による細胞増殖反応のポジティブな細胞内メディエーターとして作用していることを明らかにした。しかしながら、SAP-2の脱チロシンリン酸化基質蛋白質や、Ras活性化の詳細なメカニズムに関しては未だ不明のままである。そこで、本研究において、私達は、SAP-2の標的基質蛋白質の同定、遺伝子クローニングを計画した。さらに、消化器癌におけるSAP-2癌性変異の同定を計画した。1.v-Srcによりトランスフォームされたfibroblastよりアフィニティー精製により、SAP-2の標的基質蛋白質であるpp120の精製、全長cDNAのクローニングに成功した。pp120は、SAP-2の脱チロシンリン酸化基質蛋白質考えられたため、SHPS-1(SHP Substrate-1)と命名した。SHPS-1は、分子量120kDaの受容体型の糖化膜蛋白質で、複数の免疫グロブリン様構造を細胞外部分に、4個のYXXL/V/Iチロシンリン酸化モチーフを細胞内部分に有している。さらにSHPS-1が、インスリン等の増殖因子刺激のみならず、細胞接着刺激依存性にチロシンリン酸化され、SAP-2がそのSH2ドメインを介してSHPS-1に結合することを見い出した。2.各種大腸癌、膵癌、胃癌細胞株より、PT-PCR法により、SAP-2遺伝子を増幅し、SAP-2遺伝子異常を検出しようと試みた。しかしながら、現在までのところ、癌細胞に特異的なSAP-2の遺伝子異常は検出されていない。3.SHPS-1のSAP-2による、脱チロシンリン酸化の生理的意義や、SHPS-1のSAP-2によるRas活性化機序における役割の詳細は未だ明らかでない。さらに、SAP-2の細胞癌化機構への関連も不明である。今後、さらにこれらの点に留意しつつ研究を進めることにより、SAP-2のより詳細な作用機構が解明されるものと思われる。

我们发现 SAP-2 是一种具有 src-homology2 区域（SH2 结构域）的 PTPase，在胰岛素刺激激活 Ras 过程中发挥着至关重要的作用。据揭示，该蛋白充当增殖反应的正细胞内介质。然而，SAP-2去酪氨酸磷酸化的底物蛋白和Ras激活的详细机制仍不清楚。因此，在本研究中，我们计划鉴定并克隆SAP-2的靶底物蛋白。此外，我们计划鉴定胃肠癌中的 SAP-2 癌性突变。 1. 我们成功纯化了 SAP-2 的靶底物蛋白 pp120，并通过亲和纯化从 v-Src 转化的成纤维细胞中克隆了全长 cDNA。由于pp120被认为是SAP-2去酪氨酸磷酸化的底物蛋白，因此将其命名为SHPS-1（SHP Substrate-1）。 SHPS-1是一种受体型糖化膜蛋白，分子量为120 kDa，胞外部分具有多个免疫球蛋白样结构，胞内部分具有四个YXXL/V/I酪氨酸磷酸化基序。此外，我们发现SHPS-1不仅响应胰岛素等生长因子，而且以细胞粘附依赖性方式被酪氨酸磷酸化，并且SAP-2通过其SH2结构域与SHPS-1结合。 2.我们尝试通过PT-PCR从多种结肠癌、胰腺癌和胃癌细胞系中扩增SAP-2基因并检测SAP-2基因的异常。然而，迄今为止，尚未检测到癌细胞特异的 SAP-2 基因异常。 3.SAP-2对SHPS-1去酪氨酸磷酸化的生理意义以及SHPS-1在SAP-2激活Ras机制中的详细作用尚不清楚。此外，SAP-2与细胞癌变机制的关系也尚不清楚。今后，通过围绕这些点继续研究，预计将阐明SAP-2更详细的作用机制。