チロシンホスファターゼSHP-2の標的基質蛋白質に関する研究

酪氨酸磷酸酶SHP-2靶底物蛋白的研究

基本信息

批准号：
10152240
负责人：
的崎尚
金额：
$ 3.2万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10152240/
关键词：
チロシンホスファターゼ SHP-2 SHPS-1 Ras MAPキナーゼ

项目摘要

研究代表者は、src-ホモロジー2領域(SH2ドメイン)を有しているPTPase、SHP-2を発見し以後一貫してこのPTPaseの細胞増殖機構における生理的役割につき研究を継続している。SHP-2は、様々な増殖因子刺激によるRas/MAPキナーゼの活性化に重要な役割を果たしている。SHP-2の生理機能を明らかにする上で、最近、私達は、SHP-2の結合基質蛋白質SHPS-1(SHP Substrate-1)の遺伝子クローニングに成功している。SHPS-1は、分子量120kDaの受容体型の糖化膜蛋白質で、4個のYXXL/V/Iチロシンリン酸化モチーフを細胞内部分に有している。増殖因子刺激や細胞接着刺激等によりSHP-2はSHPS-1と複合体を形成することにより活性化され、Ras/MAPキナーゼカスケードを活性化する可能性が想定される。しかしながら、SHPS-1/SHP-2複合体による、Ras/MAPキナーゼ活性化の詳細な機序は未だ不明である。そこで、本研究計画においては、以下の研究を行った。[1]SHPS-1の細胞内、外ドメインに対する結合分子の同定免疫グロブリンFc領域との融合蛋白とした可溶性SHPS-1細胞外ドメインを大量に精製し、これを探子として、SHPS-1リガンド候補蛋白質の解析を行った。肝臓、及び脳にSHPS-1リガンドの存在を示唆する結果を得ている。現在、Cos細胞を用いた発現クローニングを行っている。一方、SHPS-1の細胞内ドメインに結合する蛋白質を酵母LexA-Two-Hybrid Systcmを用いスクリーニングしたが、有望なクローンは得られなかった。[2]SHS-1遺伝破壊マウスの作製と解析SHPS-1遺伝子破壊マウスを作製した。[3]新規SHP-2結合基質蛋白質の同定SHP-2結合基質蛋白質は、PTPase活性を喪失した変異型SHP-2を強制発現させた際には、高度にチロシンリン酸化され且つSHP-2と安定な複合体を形成する分子量100K蛋白質を精製した。

研究代表一直在研究具有SRC-同学2（SH2域）的PTPase和SHP-2，并且一直在研究PTPase细胞生长机制。由于各种增殖因子刺激，SHP-2在激活RAS/MAP激酶中起着重要作用。为了阐明SHP-2生理功能，我们最近成功地克隆了SHP-2结合底物蛋白SHPS-1（SHP底物-1）。 SHPS-1是一种糖蛋白，分子量为120kDa，并且在细胞中具有四个YXXL/V/I酪氨酸氧化物。由于增殖性刺激或细胞粘合剂刺激，通过与SHPS-1形成复合物，可以激活SHP-2，并有望被RAS/MAP激酶casked激活。但是，SHPS-1/SHP-2复合物的RAS/MAP激酶激活的详细机制仍然未知。因此，在本研究计划中，进行了以下研究。 [1]在SHPS-1的细胞内，分析了与外域分析的结合分子的鉴定。它获得了肝脏和大脑的结果，表明存在SHPS-1配体。目前，它正在使用COS细胞执行表达克隆。另一方面，使用酵母Lexa-Two-Hybrid SystCM筛选了与SHPS-1的细胞内结构域结合的蛋白质，但没有获得有希望的克隆。 [2]创建了SHS-1遗传破坏小鼠SHPS-1基因破坏小鼠的制造和分析。 [3]新的SHP-2结合底物蛋白鉴定SHP-2结合底物蛋白是高度酪氨酸中氧化和SHP-2时，当突变体型SHP-2（损失PTPase活性）是高度酪氨酸蛋白氧化的氧化剂。形成稳定复合物的分子量100K蛋白已被纯化。