心筋細胞間の結合形成にいたる分子機構の発現過程にかんする研究

心肌细胞间连接形成分子机制表达过程研究

基本信息

批准号：
06274222
负责人：
柴田洋三郎
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ギャップ結合の構成分子はコネキシン(Cx)と呼ばれ、一群のCx蛋白ファミリーが存在する。哺乳類心筋ではCx43が主体で、Northern blotではCx40、Cx45なども検出されている。本研究ではこれら異種ギャップ結合蛋白の心筋各種細胞での発現様態を解析するために、特異的な抗体を作成してその分布局在を調べた。◎方法:cDNAより得られたアミノ酸配列から、Cx43、Cx40、Cx45、の各々に特異的なペプチド配列(Cx43:107-119、Cx40:333-345、Cx45:385-396)にたいするウサギ抗血清を作成し、ラットとモルモット成獣の心臓凍結切片の免疫蛍光染色と免疫ブロット・RNAブロットなどによって発現を解析した。◎結果:心筋全体でCx43が免疫染色・免疫ブロットともに強く発現しており、とくに作業心筋の介在板部に特徴的に分布していた。しかしCx40やCx45も弱いながら作業筋でもCx43と重なって発現し、介在板でこれら3種のコネキシンが混在してギャップ結合を構成することが判明した。一方、房室束やブルキンエ線維などの刺激伝導系では、Cx43よりもむしろCx40が強く認められた。またラット・モルモットとも心房の洞房結節領域に、3種抗体のいずれによっても標識されない部分が認められ、その周辺域にはCx45の介在を認めた。◎結語:免疫標識により、作業心筋では3種のコネキシン蛋白が介在板で混在し、また特殊心筋ではギャップ結合の蛋白構成比が異なることが判明した。コンダクタンスはCx43:40-50pS、Cx40:160-195pS、Cx45:20-35pSであり、また電位依存特性も大きく異なっている。今後、これら各種のコネキシン分布の心筋機能に於ける意義、および発生分化過程における発現調節機構を明らかにするとともに、洞房結節に分布するコネキシンの同定をすすめていきたい。

间隙连接的组成分子称为连接蛋白（CX），并且有一组CX蛋白质家族。 CX43是哺乳动物心肌的主体，在北印迹中也检测到CX40和CX45。在这项研究中，创建了特定的抗体来分析这些异源间隙连接蛋白在各种心肌细胞中的表达，并检查了它们的分布和定位。 ◎Method: Rabbit antiserum was prepared for peptide sequences specific to Cx43, Cx40, and Cx45 (Cx43:107-119, Cx40:333-345, Cx45:385-396) each of Cx43, Cx40, and expression was analyzed by immunofluorescence staining of heart cryosections of rats and guinea pigs,免疫印迹，RNA印迹等。结果：CX43的免疫染色和免疫印迹均在整个心肌中强烈表达，并且在工作心肌的板间部分中尤其独特地分布。然而，尽管CX40和CX45较弱，但它们在与CX43重叠的工作肌肉中表达，发现这三种类型的连接蛋白在间质等离子体上混合在一起以形成间隙连接。另一方面，在刺激传导系统（如心室束和brukinje纤维）中，CX40比CX43更强烈地观察到CX43。此外，大鼠和豚鼠均显示出三种类型的抗体中的任何一部分在心房的辛里尔节点区域中未标记的一部分，并且CX45均在周围区域进行干预。结论：发现通过免疫标记，在工作心肌中将三种类型的连接蛋白与交织的板混合在一起，而间隙连接的蛋白组成比在特殊心肌中有所不同。电导率为CX43：40-50PS，CX40：160-195PS，CX45：20-35PS，并且依赖电压的特性也非常不同。将来，我们将阐明这些各种连接蛋白分布在心肌功能和发育分化过程中表达调节的机理的重要性，我们还将建议鉴定在Sinoatrial节点中分布的连接素。