心筋に発現するギャップ結合コネキシン蛋白の条件下欠損マウスの作製と、その解析

心肌表达间隙连接蛋白条件性缺失小鼠的产生及其分析

基本信息

批准号：
12770007
负责人：
西井清雅
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770007/
关键词：
心臓ギャップ結合コネキシン gene targeting heart gap junction connexin

项目摘要

1.平成12年度に発表したCx45欠損マウスの表現型解析に関する論文が高い評価を受け、研究の背景や将来の展望等をreview articleにまとめて発表した(Trends Cardiovasc Med 11:213-218,2001)。2.Cx45の機能解析を進めるため、Cx45のダブルノックアウトES細胞を作製して、その細胞分化系譜を解析している。Cx45のダブルノックアウトES細胞は、胎生早期に排除されて成熟組織になることができない。細胞表面に存在するギャップ結合の互換性や、それにまつわる細胞内反応系の異常があるとの仮説を検証中である。3.胎生8.5日胚を用いたDNAマクロアレイ解析の結果をもとに、Cx45欠損胚を各種免疫染色して胎生死の分子機構の詳細を解析中である。4.条件下Cx45欠損マウス作製のため、ターゲティングベクターを構築した。ベクターは相同組換えによりES細胞に導入され、germline chimeraが得られた。5.Cx43-Cx45ダブルノックアウトマウスを作製して、受精卵からの発生状況を解析している。6.大阪府立成人病センター研究所生化学部門瀧原研究室との共同研究において、Rae28トランスジェニックマウスが引き起こす拡張型心筋症の、電子顕微鏡による微細構造解析を行った(Lab Invest, in press)。7.九州大学大学院医学研究院分子生命科学教室細胞工学講座との共同研究において、人工授精による、減数分裂期におけるRanBPM蛋白質の細胞内局在の同定を行い、論文として公表された(Gene 272:25-33,2001)。

1。关于2000年发表的CX45缺陷小鼠表型分析的论文，受到了高度赞扬，研究和未来前景的背景是在评论文章中汇编的（Cardiovasc Med 11：213-218,2001）。 2。为了进一步分析CX45功能分析，产生了CX45的双基因敲除ES细胞，并分析了细胞分化谱系。 CX45双基因敲除ES细胞在体内被消除，无法成为成熟的组织。我们目前正在测试以下假设：细胞表面上存在间隙连接的兼容性，并且围绕它们的细胞内反应系统存在异常。 3。基于使用胚胎胚胎进行8.5天的DNA宏观阵列分析的结果，我们目前正在通过免疫染色的各种CX45缺陷胚胎来分析胚胎生命和死亡的分子机制的细节。 4。在条件下构建了靶向载体，以生产CX45缺陷小鼠。通过同源重组将载体引入ES细胞中以产生种系嵌合体。 5.CX43-CX45双基因敲除小鼠准备分析受精卵的发生。 6。在大阪成人疾病中心研究所生物化学系的Takihara实验室的联合研究中，使用电子显微镜（实验室投资，印刷中）进行了由RAE28转基因小鼠引起的rae28转基因小鼠的膨胀心肌病的显微结构分析。 7。在京都大学医学研究生院分子生命科学系与细胞工程系的联合研究中，通过人工启示鉴定了减数分裂阶段RANBPM蛋白的亚细胞定位的授精，并作为论文出版（Gene 272：25-33，2001）。