核-細胞質間輸送の制御下にあるシナプス可塑性形成機構の可視化

核质运输控制下突触可塑性形成机制的可视化

基本信息

批准号：
20590184
负责人：
西井清雅
金额：
$ 1.75万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20590184/
关键词：
核-細胞質問輸送 Rcc1 可塑性

项目摘要

神経細胞の発生、及び可塑性形成に関連のある転写制御因子がどのような時系列で働くのか、まだ未解明の部分が多い。本研究課題の目的は、我々が独自に作製した遺伝子変異マウスにより核-細胞質問の物質輸送を任意のタイミングで変質させ、神経刺激が特定の転写調節に影響を及ぼし、神経細胞の反応として現れる過程を可視化することである。核-細胞質問物質輸送の制御因子であるRcc1遺伝子座に2種類の遺伝子変異(tsマウス、及びfloxマウス)を導入したマウスは作製済みである。本年度は核-細胞質問の物質輸送を任意のタイミングで変質させ、その表現型を知るため、以下の実験を行った。・Cre発現とRcc1活性の減衰の関係を明らかにした。また、細胞の培養温度によらず温度感受性tsアレル由来のRcc1蛋白は検出できず、プロテアソーム阻害剤を加えてもtsアレル由来Rcc1の発現量は回復しなかった。この理由は今のところ不明であり、温度感受性変異細胞株tsBN2の所見とも異なることから、今後さらに調査を進めていく予定である。・Cre発現システムを再検討し、CreとEGFPを共発現するレトロウイルスベクターを作製した。レトロウイルスはゲノムに組み込まれるため、発生過程の神経細胞に感染させることによってその分化系統を追跡することが可能となった。・ラベル遺伝子の導入条件を検討した。分散培養神経細胞への遺伝子導入法として、リン酸カルシウム法の条件検討を行い、当研究室では従来成しえなかった高い効率で外来遺伝子を発現させることに成功した。出生後約2週間で致死となるCaMKIIプロモーターCreによる皮質特異的Rcc1ノックアウトマウスの表現型解析を進めた。脳スライスの組織学的解析において、変異マウスの海馬は野生型に比べて低形成を示した。今後、出生後から系統的に組織像の変化を追跡して表現型との関連を説明したい。・出生後約2週間で致死となるCaMKIIプロモーターCreによる皮質特異的Rcc1ノックアウトマウスの表現型解析を進めた。脳スライスの組織学的解析において、変異マウスの海馬は野生型に比べて低形成を示した。今後、出生後から系統的に組織像の変化を追跡して表現型との関連を説明したい。

关于与神经元发育和可塑性形成相关的转录调节剂的时间表仍然有很多理解。该研究主题的目的是通过我们独立创建的遗传突变小鼠在任何时候改变核细胞询问的运输，并可视化神经刺激会影响特定的转录调节的过程，并将其自身表现为神经元细胞的反应。已经在RCC1基因座的两种类型的基因突变（TS小鼠和Flox小鼠）引入的小鼠是核细胞询问剂转运的调节剂。今年，我们在任何给定时间改变了核细胞问题的物质运输，并进行了以下实验以找出表型。 - CRE表达与RCC1活性的衰减之间的关系。此外，无论细胞的培养温度如何，都无法检测到源自TS等位基因的温度敏感的RCC1蛋白，即使在添加蛋白酶体抑制剂时，也恢复了从TS等位基因的RCC1的表达水平。目前的原因是未知的，并且与温度敏感的突变细胞系TSBN2的发现有所不同，因此计划将来进行进一步的研究。 - 重新审查了CRE表达系统，并制备了逆转录病毒载体共表达CRE和EGFP。由于逆转录病毒被整合到基因组中，因此它们可以通过感染发育中的神经元来跟踪其分化线。 - 研究了引入标签基因的条件。研究了磷酸钙方法的条件，作为一种基因转移到分散培养的神经元中的方法，实验室能够以高效率成功地表达外国基因，这在过去无法实现。使用CAMKII启动子CRE对皮质特异性RCC1敲除小鼠进行表型分析，该小鼠在出生后大约2周就致死。对脑切片的组织学分析表明，与野生型相比，突变小鼠的海马表现出低流血症。将来，我想从出生后系统地跟踪组织学形象的变化，并解释与表型的关系。 - 使用CAMKII启动子Cre对皮质特异性RCC1敲除小鼠进行表型分析，该小鼠在出生后大约2周就致命。对脑切片的组织学分析表明，与野生型相比，突变小鼠的海马表现出低流血症。将来，我想从出生后系统地跟踪组织学形象的变化，并解释与表型的关系。