ギャップ結合蛋白質コネキシン細胞分化への関与についての検討

间隙连接蛋白参与连接蛋白细胞分化的研究

基本信息

批准号：
07770011
负责人：
西井清雅
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770011/
关键词：
ギャップ結合コネキシン核膜孔細胞周期アポトーシス RanBP2 DADI

项目摘要

1.巨大核膜孔蛋白質RanBP2のヒトcDNAをクローン化、シーケンス解析した。(Nature,376(6536),184-188,1995)2.マウス129/SvJ由来ゲノムライブラリより、ギャップ結合蛋白質コネキシンのgenomic DNAをクローン化した。コネキシンはファミリーを形成しており、クローン化したゲノム断片には予想通り数種のopen reading frameが存在していた。これらのDNA断片の一部はシーケンス解析しており、今後より詳細なシーケンス解析、マッピングを行う。必要があればジーンウォーキングによりさらに広範囲なゲノム解析を行う。マッピングの進んだクローンに対しては、ターゲティングベクターを設計、ジーンターゲティング法によりノックアウトマウスを作製している。3.アポトーシス抑制遺伝子DADIについて、マウス129/SvJ由来ゲノムをクローン化、ゲノムのシーケンス解析におよびマッピングを行った。同時にRACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)法を応用し、マウスDADIのcDNA配列及びアミノ酸配列がほぼ明かとなった。特にアミノ酸配列はヒトDADIと100%の相同性を示していた。また、cDNAの5'末端の配列をもとに転写開始部位近傍のゲノム構造解析を行っている。ターゲティングベクターを設計しており、ジーンターゲティング法によりノックアウトマウスを製作中である。

1。巨型核孔蛋白RANBP2的人cDNA被克隆并测序。（自然，376（6536），184-188，1995）2。间隙连接蛋白连接素的基因组DNA从源自源自小鼠129/svj的基因组库中克隆。连接蛋白形成一个家庭，正如预期的那样，克隆的基因组片段中存在几个开放式阅读框。这些DNA片段中的一些已经进行了测序，将来将进行更详细的序列分析和映射。如有必要，可以通过Genwalking进行进一步的广泛基因组分析。对于具有高级映射的克隆，设计靶向向量，并使用基因靶向方法产生敲除小鼠。 3。对于抑制基因DADI，将小鼠129/SVJ衍生的基因组克隆，进行基因组序列分析和映射。同时，将种族（cDNA末端的快速扩增）方法用于几乎揭示小鼠dadi的cDNA和氨基酸序列。特别是，氨基酸序列与人dadi显示100％同源。此外，基因组结构分析是根据cDNA 5'端的序列在转录起始位点附近进行的。我们已经设计了靶向向量，目前正在使用基因靶向方法制作敲除小鼠。