心筋細胞間の機能結合形成にいたる分子機構の発現過程にかんする研究

心肌细胞间功能连接形成分子机制表达过程研究

基本信息

批准号：
08258220
负责人：
柴田洋三郎
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08258220/
关键词：
ギャップ結合心筋コネキシン Cx43 Cx40 Cx45 内皮細胞 Cx37

项目摘要

ラット心臓の発達過程におけるギャップ結合構成蛋白の発現パターンを特異抗体とcDNAプロープを用い検討した。心筋ギャップ結合は介在板の縦走部にあって細胞間の興奮伝達経路となり、コネキシン(Cx)蛋白群のうちCx40、Cx43、Cx45の少なくとも3種類の構成蛋白が存在している。ノーザン法では出生時から成獣期にかけCx43mRNAが増加するのに対し、Cx40およびCx45mRNAは成長につれ逆に発現の減少を認めた。心抽出膜分画のウエスタンブロット分析では出生時に優位なCx40の発現を認め、またCx43は新生仔と成獣との間でリン酸化状態の相違を示唆するバンドの移動がみられた。心凍結切片を用いた蛍光抗体法にて抗Cx43抗体では心発達の経過を通して心房、心室共に強い免疫標識を認めた。抗Cx40抗体では胎生末期から生直後の心室部において心内膜側に強く心外側に弱いgradient状の標識パターンを認めたが、生後1日目にはこの標識は心内膜側のプルキンエ線維に相当する部位に限局し、成獣と同じ分布パターンを示した。心房では生後一週まで強いCx40の標識を認めたが、2週目には消失した。抗Cx45抗体では標識レベルはかなり低いものの、新生仔心室でCx40と似た分布パターンが認められた。また心房では発達過程を通して弱い標識が常に認められた。内皮細胞にはCx37、Cx40およびCx43が発現し、大動脈・肺動脈ではCx40>Cx37>Cx43、肺静脈・上大静脈ではCx40、下大静脈ではCx37とCx43、心房の内膜内皮ではCx37、左右房室弁の内皮ではCx37>>Cx43という発現パターンが認められた。左右房室弁の内皮ではCx37は心室側、Cx43は心房側に発現する傾向が認められた。以上の結果は、電位依存性などの生理特性の異なるコネキシン分子種群がラット心臓の発達過程において時間的および空間的に異なる発現調節を受けていることを示唆する。

我们使用特异性抗体和 cDNA 探针研究了大鼠心脏发育过程中间隙连接组成蛋白的表达模式。心肌间隙连接位于闰盘的纵向部分，作为细胞间兴奋和传递的通路，并且包含至少三种连接蛋白（Cx）蛋白组的组成蛋白：Cx40、Cx43和Cx45。在Northern方法中，Cx43 mRNA从出生到成年期间增加，而Cx40和Cx45 mRNA表达随着动物年龄的增长而减少。心脏膜组分的蛋白质印迹分析显示出生时 Cx40 的主要表达，并且观察到 Cx43 带的变化表明新生儿和成人之间的磷酸化状态存在差异。使用冷冻心脏切片的荧光抗体方法，抗 Cx43 抗体在整个心脏发育过程中的心房和心室中显示出强烈的免疫标记。使用抗Cx40抗体，从胚胎后期到出生后立即在心室区域观察到梯度样标记模式，心内膜侧强，外侧弱，但在出生后第一天，这种在心内膜侧的浦肯野纤维中发现了标记，它们位于相应的区域，并表现出与成人相同的分布模式。直到出生后一周，心房中才观察到强烈的 Cx40 标记，但到第二周就消失了。抗 Cx45 抗体在新生儿心室中表现出与 Cx40 相似的分布模式，但标记水平要低得多。此外，在整个发育过程中，心房中始终观察到弱标记。 Cx37、Cx40和Cx43在内皮细胞中表达，主动脉和肺动脉中Cx40>Cx37>Cx43，肺静脉和上腔静脉中Cx40，下腔静脉中Cx37和Cx43，心房内膜内皮中Cx37 ，并且在心室瓣膜的内皮中，观察到Cx37>>Cx43的表达模式。在左右房室瓣的内皮中，Cx37倾向于在心室侧表达，Cx43倾向于在心房侧表达。这些结果表明，在大鼠心脏发育过程中，具有不同生理特性（例如电压依赖性）的连接蛋白分子种类以不同方式在时间和空间上受到调节。