培養心筋におけるギャップ結合の形成および調節機構の研究

培养心肌间隙连接形成及调控机制的研究

基本信息

批准号：
04248207
负责人：
柴田洋三郎
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

心房筋と心室筋の混合培養:細胞の由来同定を容易にするため、培養3日目の成獣ラット心房培養細胞層に生後3日目の新生児ラット心室筋を同じ方法で単離したものを混合し、成獣由来の大型細胞と新生児由来の小型細胞との間での異種細胞間の接着・結合を形成させ、異種細胞間での細胞間結合の特性解析を試みた。(1)培養3日目の成獣心房筋はまだ同期した拍動を示していないが、新生児心室筋を加えると約6時間後から、同期拍動がみられるようになり、これには主として小型の新生児細胞と大型の成獣細胞の間、小型の新生児細胞を介して成獣細胞の間、小型の新生児細胞を介して成獣心房細胞の間など、いづれも新生児由住の小型細胞が関与することがわかった。この伝達促進機構としては、新生児細胞がペースメーカー細胞としての役割をはたす、液性因子の分秘による、又は細胞密度の増加ないしは大型細胞間に小型細胞が介在することによる接触頻度の増加などの可能性をさらに詳しく検討する必要がある。(2)電子顕微鏡観察によると、成獣大型細胞の突起が小型細胞の核近傍の胞体に接着し、ギャップ結合を形成している像がみられた。小型細胞は、筋原線維の配列が未発達なことなどから、新生児心室筋細胞と推測された。(3)心房性ナトリウム利尿ペプチド(ANP)への抗体により、大型細胞は豊富なANP顆粒を胞体に含み心房筋細胞由来であることが確認され、一方接着する小型細胞は核周辺に少量の顆粒を認めるのみであった。とくに心室筋由来細胞での結合形成による顆粒増加傾向は認めなかった。(4)心筋型ギャップ結合蛋Cx43に特異的な抗体を用いて免疫標識を行うと、両種細胞間に特異蛍光が点状に分布することがみられ、ギャップ結合の存在分布が確認された。(5)Scrape-loading法により、両者間の色素伝播観察が認められ、各種ギャップ結合連絡の抑制薬剤の投与に対しては、成獣心房筋培養系とほぼ同様の減少低下を示した。以上の観察から、この混合培養系にいても成獣心房筋培養細胞と同様のギャップ結合連絡の特徴が認められた。今後はさらい、混合培養したことによる伝播促進の機構を含め、さらに詳しい解析を進めていきたい。

心房和心室肌的混合培养：为了便于鉴定细胞来源，将使用相同方法分离的3天龄新生大鼠心室肌与3天龄培养的成年大鼠心房细胞层混合。我们试图在成年动物的大细胞和新生儿的小细胞之间形成不同类型细胞之间的粘附/结合，并表征不同类型细胞之间的细胞间连接。 (1)培养第3天，成人心房肌尚未出现同步搏动，但加入新生儿心室肌后，约6小时后开始出现同步搏动，这主要是由于新生儿小细胞可能理解，例如新生儿细胞和大的成人细胞之间、成人细胞之间通过小新生儿细胞、以及成人心房细胞通过小新生儿细胞之间。促进这种传播的可能机制包括充当起搏细胞的新生儿细胞、体液因子的分泌以及由于细胞密度增加或大细胞之间存在小细胞而增加的接触频率。有必要更详细地考虑性别。 (2)电镜观察发现，大的成体细胞的突起粘附在小细胞核附近的细胞质上，形成间隙连接。根据未发育的肌原纤维排列，推测这些小细胞是新生儿心室肌细胞。 (3)使用抗心房钠尿肽(ANP)抗体，证实大细胞的细胞体内含有丰富的ANP颗粒，且源自心房肌细胞，而粘附在细胞上的小细胞则在细胞周围含有少量颗粒。核才被承认。特别是，由于心室肌来源的细胞中的连接形成，颗粒没有增加的趋势。 (4)当使用心脏间隙连接蛋白Cx43特异性抗体进行免疫标记时，在两种类型的细胞之间观察到特异性荧光的点状分布，证实了间隙连接的分布。 (5)使用刮荷法观察两者之间的染料传播，当给予各种抑制间隙连接通讯的药物时，其减少程度几乎与成人心房肌培养系统中相同。从上述观察来看，在该混合培养系统中观察到与培养的成体心房肌细胞相似的间隙连接通讯特征。未来我们想进行更详细的分析，包括绑架和混合文化的传播促进机制。