培養心筋におけるギャップ結合の形成および調節機構の研究

培养心肌间隙连接形成及调控机制的研究

基本信息

批准号：
04248207
负责人：
柴田洋三郎
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

心房筋と心室筋の混合培養:細胞の由来同定を容易にするため、培養3日目の成獣ラット心房培養細胞層に生後3日目の新生児ラット心室筋を同じ方法で単離したものを混合し、成獣由来の大型細胞と新生児由来の小型細胞との間での異種細胞間の接着・結合を形成させ、異種細胞間での細胞間結合の特性解析を試みた。(1)培養3日目の成獣心房筋はまだ同期した拍動を示していないが、新生児心室筋を加えると約6時間後から、同期拍動がみられるようになり、これには主として小型の新生児細胞と大型の成獣細胞の間、小型の新生児細胞を介して成獣細胞の間、小型の新生児細胞を介して成獣心房細胞の間など、いづれも新生児由住の小型細胞が関与することがわかった。この伝達促進機構としては、新生児細胞がペースメーカー細胞としての役割をはたす、液性因子の分秘による、又は細胞密度の増加ないしは大型細胞間に小型細胞が介在することによる接触頻度の増加などの可能性をさらに詳しく検討する必要がある。(2)電子顕微鏡観察によると、成獣大型細胞の突起が小型細胞の核近傍の胞体に接着し、ギャップ結合を形成している像がみられた。小型細胞は、筋原線維の配列が未発達なことなどから、新生児心室筋細胞と推測された。(3)心房性ナトリウム利尿ペプチド(ANP)への抗体により、大型細胞は豊富なANP顆粒を胞体に含み心房筋細胞由来であることが確認され、一方接着する小型細胞は核周辺に少量の顆粒を認めるのみであった。とくに心室筋由来細胞での結合形成による顆粒増加傾向は認めなかった。(4)心筋型ギャップ結合蛋Cx43に特異的な抗体を用いて免疫標識を行うと、両種細胞間に特異蛍光が点状に分布することがみられ、ギャップ結合の存在分布が確認された。(5)Scrape-loading法により、両者間の色素伝播観察が認められ、各種ギャップ結合連絡の抑制薬剤の投与に対しては、成獣心房筋培養系とほぼ同様の減少低下を示した。以上の観察から、この混合培養系にいても成獣心房筋培養細胞と同様のギャップ結合連絡の特徴が認められた。今後はさらい、混合培養したことによる伝播促進の機構を含め、さらに詳しい解析を進めていきたい。

心房肌肉和心室肌肉的混合培养：为了促进细胞起源的鉴定，我们将成年大鼠的房间细胞培养的细胞培养的细胞层与生命的第三天的新生大鼠心室肌肉相同的方法，并形成了来自成年动物和小细胞之间的粘合物之间的粘合物，并在成年动物之间形成粘合物，并在成年动物之间形成蛋白质，并在成年动物之间衍生出较大的小细胞，并在小细胞中衍生出了小细胞，并在小细胞中衍生出了小细胞，并在小细胞中衍生出了小细胞，并在小细胞中衍生出了小细胞，并在小细胞中衍生出了小细胞，并在小细胞中衍生出了糖尿病的特征。细胞。 (1) Although the adult atrial muscle on the third day of culture did not yet show synchronized beats, synchronous beats began to appear approximately 6 hours after the addition of neonatal ventricular muscle, and it was found that this was mainly involved in small neonatal cells, between small neonatal cells and large adult cells, between adult cells via small neonatal cells, and between adult atrial cells via small neonatal cells via small neonatal cells.这种传播促进机制需要详细检查新生儿细胞作为起搏器细胞的作用，由于体液因子的分泌或增加的细胞密度或由于大细胞之间的小细胞介入而引起的接触频率。（2）根据电子显微镜，我们可以看到粘附在小细胞核附近的内肿的大型细胞的突起的图像，形成间隙连接。小细胞被推断为新生儿心室肌细胞，因为它们在肌原纤维序列中的发育不足。（3）对心房利尿肽（ANP）的抗体证实，大细胞含有内质中的大量ANP颗粒，并源自心肌细胞，而粘附的小细胞仅显示核周围的少量颗粒。由于心室衍生细胞的结合形成，没有增加颗粒的趋势。（4）当使用对心肌间隙连接蛋白CX43特异的抗体进行免疫标记时，观察到特异性荧光在两个物种细胞之间以点状的方式分布，以证实存在间隙连接点。（5）通过刮擦方法观察到两者之间的色素传播，并且在服用各种药物以抑制间隙连接通信时，还原与成人心房肌肉培养系统的还原几乎相同。从上述观察结果中，在该混合培养系统中观察到与成年心房肌肉培养细胞相同的特征。将来，我们将审查并进一步提高详细分析，包括促进由混合文化引起的传播的机制。