培養心筋におけるギャップ結合の形成および調節機構の研究

培养心肌间隙连接形成及调控机制的研究

基本信息

批准号：
03253207
负责人：
柴田洋三郎
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)単離した成獣ラット心房筋細胞を培養し,細胞間の刺激伝達が生じ同調収縮が始まる前後のギャップ結合の発達を凍結割断レプリカによる電顕観察で追跡した。末だ同調収縮を認めない3〜4日目に,すでに5〜10個程の小さなギャップ結合粒子斑が散在性に出現した。割断P面の粒子数は細胞間あたり50をこえることから,興奮の安定伝達には少なくとも100以上のギャップチャンネル通路を要すると推定される。4日目以降一時的に線状や帯状の非定型粒子配列を示すものが出現した。7日目には典型的な斑状粒子集合が完成し,活発な拍動興奮の伝幡が多くの心筋細胞に認められた。(2)心筋型ギャップ結合の構成蛋白コネキシン43のcDNA配列から,細胞外領域と細胞質領域の部分ペプチドshibaー5とshibaー7を合成し,ウサギに特異抗体を作って培養心筋での免疫蛍光標識を行った。2日目に標識を細胞質内に認め,3〜4日目から細胞表面に局在を示した。細胞表面領域の抗体は8M尿素処理により,結合を開裂した場合のみ外表面に対合する標識が認められた。(3)scrapeーloading法による色素拡散から心筋ギャップ結合伝達の調節因子を培養7〜8日目の心筋で検討した。低カルシウム外液下では7ー9細胞列以上の色素伝幡を認めた。10mMCa^<++>やTPA存在下では4ー6列以下に低下したが,完全な抑制は生じず,多重な因子が調節機構に関与すると推測される。1mMオクタノ-ルとヘプタノ-ル処理後には1ー2細胞列にまで伝幡が抑制され,これを凍結割断レプリカ観察すると,ギャップ結合周囲の細胞膜面のとくにEF面に波状縞模様を認め,これら中級アルコ-ルによるギャップ結合機能の抑制は,膜の脂質二重層に浸潤することにより乱れを引きおこし,チャンネル構造に変化が生じるためであると示唆された。

（1）培养孤立的成年大鼠房屋心肌细胞，并在细胞之间和之后引起刺激传播之前和之后的间隙连接的发展，并开始使用冷冻断裂复制品进行电子显微镜观察。在第三天和第四天，未观察到调节收缩，大约5至10个小间隙连接粒子斑点已经显示出散射。由于骨折的P平面上的颗粒数量超过每个细胞细胞的50，因此估计至少需要100或更多的间隙通道通道才能稳定的兴奋传播。从第四天开始，一些表现出非典型线性或条形颗粒的颗粒暂时出现。在第七天，完成了典型的拼布粒子组件，并在许多心肌细胞中观察到主动脉动激发。（2）从连接蛋白43的cDNA序列中，合成了细胞外和细胞质区域的心肌间隙连接的组成蛋白，部分肽Shiba-5和shiba-7，并在较含有较高的葡萄粉中进行了较大的抗体。在第2天，在细胞质中观察到标记，并在第3天到第4天显示在细胞表面上的定位。细胞表面区域中的抗体用8M尿素处理，并且仅在切割键时才匹配外表面的标签。（3）在第7至8天，在培养物中检查了在心肌中检查从色素扩散方法的心肌间隙连接传递的调节剂。在低钙外流体下，观察到7-9个细胞系或更多。尽管在存在10 mMCA^<++>和TPA的情况下，下降量低于4-6行，但没有完全抑制，并且假定该调节机制涉及多个因素。 After treatment with 1 mM octanol and heptanol, the decay was suppressed to 1-2 cell lines, and when this was observed with frozen fracture replica, a wavy stripe pattern was found in the EF surface, especially on the cell membrane surface surrounding the gap junction, suggesting that the suppression of gap junction function by intermediate alcohols is caused by invasion into the lipid bilayer of the membrane, causing disturbance and changes在通道结构中。