細胞周期にともなう微細構造の変化-とくにアポトーシスに至る過程の解析

与细胞周期相关的超微结构变化 - 特别是导致细胞凋亡过程的分析

基本信息

批准号：
05269219
负责人：
柴田洋三郎
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

すでに解明の進み細胞周期研究のモデルとなっている以下の培養細胞株を用いて細胞周期の各段階について試料を作成し、主として透過型電子顕微鏡による切片標本での所見と他の解析法による結果とを対応させて、培養細胞系の細胞死にいたる微細形態学的変化、特にアポトーシスへの移行過程の系統的な検討をこころみた。【.encircled1.】 ts BN7 mutantこの細胞系は、培養温度を39.5℃(非許容温度)に上昇させると、48時間前後で細胞死を起こし、dishより剥がれ、浮上する。また遺伝子レベルでの変異の解析からその変異を相補する新しい蛋白,DAD1を同定した。39.5℃で48時間培養したtsBN7細胞中に、核辺縁部に濃縮した染色糸が凝集し、細胞質が断片状に空泡化して微絨毛突起が消失しているが細胞小器官には変化が見られない、いわゆるアポトーシスに特徴的な細胞微細形態をとる一群の細胞が認められた。なお39.5℃で48時間培養したBHK21細胞、ならびに33.5℃(許容温度)で培養中のBN7細胞にはこのような形態を示す細胞は認められず、これらの形態変化が温度依存的にBN7細胞に起こったことが確認された。【.encircled2.】 HL-60 cellこの急性骨髄性白血病細胞株をロテノン(酸化的リン酸化阻害剤)で処理すると12-24時間で細胞死が引き起こされる。この細胞死を生化学的な所見と電顕的観察とを対応させてに検討したところ、上記のいわゆる核の断片化にたいして細胞小器官は変化のないアポトーシスに特徴的な形態をとる一群の細胞が確認された。現在これらの細胞系におけるアポトーシスにいたるまでの一連の形態学的変化の過程をさらに詳細に検討している。

我们使用以下培养的细胞系制备了细胞周期每个阶段的样品，这些细胞系已被充分理解并已成为细胞周期研究的模型，并主要分析了使用透射电子显微镜的切片标本的结果和其他分析的结果与此相结合，我们尝试系统地检查导致培养细胞系中细胞死亡的微形态变化，特别是向细胞凋亡的转变过程。 [.encircled1.]ts BN7突变体当培养温度升至39.5℃（非允许温度）时，该细胞系在48小时左右发生细胞死亡，从培养皿中脱离并浮到表面。此外，通过分析基因水平的突变，我们发现了一种新的蛋白质 DAD1，它可以补充这些突变。 39.5℃培养48小时的tsBN7细胞中，浓缩的染料丝聚集在核边缘，细胞质变成碎片状的空泡，微绒毛消失，但细胞器没有变化，是一组具有细胞形态特征的细胞。观察到所谓的细胞凋亡。请注意，在 39.5°C 培养 48 小时的 BHK21 细胞或在 33.5°C（允许温度）培养的 BN7 细胞中没有观察到表现出这种形态的细胞，表明这些形态变化在 BN7 细胞中以温度依赖性方式发生。确认发生了什么事。 [.encircled2.] HL-60 细胞用鱼藤酮（一种氧化磷酸化抑制剂）处理这种急性髓性白血病细胞系会在 12-24 小时内导致细胞死亡。当我们通过将生化结果与电子显微镜观察相关联来检查这种细胞死亡时，我们发现一组细胞具有凋亡的形态特征，尽管证实了上述所谓的核碎片，但细胞器保持不变。我们目前正在更详细地研究导致这些细胞系凋亡的一系列形态变化。