哺乳類細胞のDNA複製に関与するDNAヘリカーゼの分子遺伝・生化学的研究

参与哺乳动物细胞 DNA 复制的 DNA 解旋酶的分子遗传学和生化研究

基本信息

批准号：
04256208
负责人：
榎本武美
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04256208/
关键词：
DNAヘリカーゼ DNA複製哺乳類細胞温度感受性変異株

项目摘要

DNA複製という細胞増殖の基本的過程が進行するためには、二本鎖DNAが巻きもどされて一本鎖になることが必要である。この過程は二本鎖DNA巻きもどし酵素(DNAヘリカーゼ)により進行される。哺乳類細胞のDNA複製機構やその開始機構を分子レベルで理解するためにはDNA複製に関与するDNAヘリカーゼを同定することが必須である。本研究ではDNAヘリカーゼがDNA依存性ATPase活性をもつことからDNA依存性ATPase活性を指標に、哺乳類細胞のDNA合成の温度感受性変異株を用いて、DNAヘリカーゼの変異株をスクリーニングし、以下のような結果を得た。(1)マウスFM3A細胞のDNA合成の温度感受性変異株をスクリーニングし、tsFT848株では非許容温度でDNAヘリカーゼBの活性が低下することを見出した。(2)この株ではヘリカーゼBが変異蛋白の本体であり、ヘリカーゼBが細胞増殖に必須であることが示唆された。(3)tsFT848細胞では非許容温度で細胞周期の進行が停止し、その主な停止点はS期初期であった。(4)非許容温度下で培養したtsFT848細胞では、DNA合成の低下と、DNAヘリカーゼBの活性の低下との間に相関がみられた。(5)DNAファイバーオートラジオグラフィーによる解析の結果、tsFT848細胞の非許容温度下でのDNA合成の低下はレプリコンレベルでのDNA複製開始頻度の低下によることが明らかになった。以上から、DNAヘリカーゼBが哺乳類細胞のDNA複製に関与するDNAヘリカーゼであることが強く示唆された。

为了进行称为DNA复制的细胞增殖的基本过程，必须拥有一个单个链DNA并成为单个链。这一过程是通过双链DNA绕组座右铭（DNA解旋酶）进行的。为了了解哺乳动物细胞的DNA复制机制及其在分子水平上的起始机制，必须鉴定参与DNA重复的DNA解旋酶。在这项研究中，DNA解旋酶具有依赖DNA的ATPase活性，因此使用DNA依赖性ATPase活性作为指数，并且使用哺乳动物的温度splanic salcard screens DNA解旋酶突变体库存。（1）筛选了小鼠FM3A细胞DNA合成的温度敏感突变量，并发现TSFT848库存在非耐受性温度下DNA解旋酶B的活性降低。（2）在这种菌株中，建议解旋酶B是突变蛋白的体，而解旋酶B对于细胞增殖至关重要。（3）在TSFT848细胞中，细胞周期进程在非耐受温度下停止，而主站点是在S初期。（4）在非耐受温度下培养的TSFT848细胞中，DNA合成的降低与DNA HelicaseB活性的降低之间存在相关性。（5）DNA纤维自动无线电图形分析表明，在TSFT848细胞的非耐受温度下，DNA合成的降低是由于DNA重复开始频率在repellcon水平下的降低所致。从以上，强烈建议DNA解旋酶B是参与哺乳动物细胞DNA重复的DNA解旋酶。