SUMO1タンパク質を介するDNA修復・組み換え修復系の分子構築

SUMO1蛋白介导的DNA修复/重组修复系统的分子构建

基本信息

批准号：
10159202
负责人：
榎本武美
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10159202/
关键词：
ワーナー症候群 Ubc9 SUMO1 Wip1 結合ドメイン核内構造体蛍光染色

项目摘要

酵母のtwo-hybrid系を用いてワーナー症候群の原因遺伝子産物(Wm)と相互作用するタンパク質をコードする遺伝子を検索し、UBC9、SUMO1、及び、新規な遺伝子WIPl(Wrner interacting protein1)をクローニングした。Wip1は大腸菌のRuvBタンパク質に部分的に相同性をもつタンパク質で、大腸菌、酵母にそのホモローグが存在した。これらの遺伝子によりコードされるタンパク質が結合するWrmの領域を欠失変異体を作って解析したところ、3つのタンパク質ともN末側に結合し、Ubc9、SUMO1ともN末側の272-514a.a.の領域に結合することが明らかになった。一方、Wip1はWrmの1-272a.a.領域に結合した。WmがSUMO1化される可能性を検討したが、現在のところその証拠は得られておらず、Ubc9の結合する領域の隣にWiP1が結合することから、WiP1がSUMO1化の標的になる可能性が高いと考えられる。酵母には、Wrmやブルーム症候群の原因遺伝子産物(Blm)のホモローグとしてSgsl(Slow growth suppressor1)が存在する。SGSl遺伝子破壊株はメチルメタンスルホン酸(MMS)に感受性になるが、酵母のWIP1相同遺伝子を破壊すると、MMSに対する感受性が消失することから、WiP1が機能的にもWrnに関連している可能性が示唆された。また、two-hybrid系により、BlmにもUbc9が結合することがわかった。次に、Wm、Blmが核のどのような構造体に存在するかを調べるためにWrm、Blmに対するモノクローナル抗体を作製して、蛍光染色により解析した。Wmは核質に細かいドット状にほぼ均一存在した。一方、Blmは比較的大きなドットとして核内に分布し、特定の構造体に組み込まれて存在する可能性が示唆された。

酵母的两杂化系统用于搜索编码与华纳综合征（WM）基因产物（WM）和UBC9，SUMO1和新型基因WIPP（WRNER相互作用蛋白1）相互作用的蛋白质的基因。 WIP1是一种与大肠杆菌RUVB蛋白部分同源的蛋白质，其同源物存在于大肠杆菌和酵母中。当创建缺失突变体并分析这些基因编码的蛋白质与该区域结合的WRM区域时，发现所有三种蛋白质都与N末端侧结合，并且UBC9和SUMO1都与N端区域272-514A.A结合。同时，WIP1绑定到1-272A.A。 WRM地区。我们已经检查了WM成为SUMO1的可能性，但是目前尚未获得证据，并且由于WIP1在UBC9结合的区域旁边结合，因此WIP1可能会成为SUMO1转换的目标。在酵母中，SGSL（缓慢的生长抑制剂1）是WRM和Bloom综合征病因（BLM）的基因产物的同源物。尽管SGSL基因破坏菌株容易受到甲基甲磺酸（MMS）的影响，但酵母WIP1同源基因的破坏会导致对MMS的敏感性丧失，这表明WIP1也可能在功能上与WRN有关。还发现，UBC9也通过两个杂交系统与BLM结合。接下来，为了确定核中存在哪些结构WM和BLM，通过荧光染色制备了针对WRM和BLM的单克隆抗体。在细点中，WM在核质中几乎是均匀的。另一方面，BLM作为相对较大的点分布在核中，这表明它可以掺入特定的结构中。