トポインメラ-ゼIIの活性調節をする特異的蛋白質リン酸化酵素の研究

调节拓扑异构酶II活性的特异性蛋白激酶的研究

基本信息

批准号：
03256203
负责人：
榎本武美
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03256203/
关键词：
DNAトポイソメラ-ゼII リン酸化細胞周期 Swiss 3T3

项目摘要

DNAトポインメラ-ゼII(トポII)の活性制御機構の一つとしてリン酸化を想定し、細胞周期におけるリン酸化の変動および、トポIIの活性に影響を及ぼすリン酸化酵素の解析をおこなった。血清濃度を下げることによりGo期に導入したSwiss3T3細胞の増殖を血清添加により誘導し、細胞周期におけるトポIIの量およびリン酸化の変動を調べた。Go期で減少していたトポII量は、S期開始前に上昇し一定レベルに達し、S期後半で再び上昇してG_2ーM期で最大になった。一方、リン酸化は、S期で徐々に上昇し始め、G_2ーM期で最大になった。アフィディコリンによりDNA合成を阻害しG_2期への移行を阻止すると、G_2ーM期に相当する時期のリン酸化の上昇は観察されなかった。次に、リン酸化のトポII活性に及ぼす影響を調べるために、精製したトポIIをアルカリ性ホスファタ-ゼで処理したところ、トポIIの活性は著しく低下した。この活性の低下したトポIIに、我々がトポIIの精製過程で見出した蛋白質リン酸化酵素(PKII)を作用させたところトポIIの活性が回復した。以上より、トポIIの活性はリン酸化により制御され、トポIIの機能が必要とされるG_2ーM期にリン酸化が最大になることが明らかになった。PKIIが細胞内でトポIIを実際にリン酸化している酵素であるかどうかを確認することが今後の課題である。

作为DNA TOPOIN MELA-ZII（TOPO II）的活性控制机制之一，假定磷酸化，并分析细胞周期中磷酸化的磷酸化和影响TOPO II活性的磷酸化酶。通过降低血清浓度，通过添加血清诱导了在GO期间引入的Swiss3T3细胞的生长，并检查了细胞周期中的TOPO II量和磷酸化中的波动。在S期开始之前，在GO期间减少的TOP II数量增加了一定水平，在S期的后半段再次上升，并成为G_2 -m时期的最大值。另一方面，在S期间，磷酸化开始逐渐升高，在G_2 -m时期内最大化。如果Affidicholine阻碍DNA的合成并阻止迁移到G_2相，则在G_2 -M时期未观察到磷酸化的增加。接下来，为了检查对磷酸化的托波普II活性的影响，用碱性hosfata-Ze处理了纯化的托普托II，并且Topo II的活性显着降低。 Topo II的活性已恢复到Topo II，从而通过蛋白质磷酸化酶（PKII）恢复了这种活性，我们在Topo II的纯化过程中发现了蛋白质磷酸化的酶（PKII）。从上面可以揭示出Topo II的活性受磷酸化的控制，并且在需要TOPO II的功能时，在G_2 -M时期内将磷酸化最大化。未来的任务是确保PKII是一种实际上在细胞中磷酸化的酶。