哺乳類細胞のDNA複製に関与するDNAヘリカーゼの分子遺伝・生化学的研究

参与哺乳动物细胞 DNA 复制的 DNA 解旋酶的分子遗传学和生化研究

基本信息

批准号：
06247204
负责人：
榎本武美
金额：
$ 1.54万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

DNA複製という細胞増殖に必須な基本的過程が進行するためには、二本鎖DNAが巻戻されて一本鎖になることが必要である。この過程は二本鎖DNA巻戻し酵素(DNAヘリカーゼ)により遂行される。昨年度、DNA複製の温度感受性変異株を分離し解析することにより、DNAヘリカーゼBが哺乳類細部のDNA複製に関与するDNAヘリカーゼであることを明らかにした。原核細胞やウイルスのDNA複製に関与するDNAヘイカ-ゼの多くのものがプライマーゼ活性を促進することから、本年度はDNAヘリカーゼBのDNAプライマーゼ活性に及ぼす影響を調べるとともに、そのcDNAのクローニングを試みた。1、マウスFM3A細胞から、DNAヘリカーゼB、DNAポリメラーゼα-プライマーゼ、一本鎖DNA結合蛋白質(RP-A)を精製し、DNAポリメラーゼα-プライマーゼのプライマーゼ活性に及ぼすDNAヘリカーゼB、RP-Aの影響を調べたところ、DNAヘリカーゼBはプライマーゼ活性を顕著に促進し、RP-Aは阻害することがわかった。さらに、RP-Aにより阻害されたプライマーゼ活性はDNAヘリカーゼBにより回復することから、DNAヘイカ-ゼBが原核細胞やウイルスのDNA複製に関与するDNAヘリカーゼと同様な作用をすることが明らかになり、機能の面からも、DNAヘリカーゼBがDNA複製に関与するDNAヘリカーゼであることを示すことができた。2、DNAヘリカーゼBを精製してアミノ酸配列を決め、そのアミノ酸配列をもとにcDNAのクローニングを試み、N末端の一部を除きcDNAをクローニングすることができた。

为了使DNA复制的基本过程（对于细胞增殖都是必不可少的），必须解开双链DNA，并变成单链。该过程是通过双链DNA解开酶（DNA解旋酶）进行的。去年，通过分离和分析DNA复制的温度敏感突变体，我们揭示了DNA解旋酶B是与哺乳动物细节中参与DNA复制的DNA解旋酶。由于许多参与原核和病毒DNA复制的DNA HEICASE促进了培养基酶活性，因此今年我们研究了DNA解旋酶B对DNA启动酶活性的影响，并试图克隆cDNA。 1。从小鼠FM3A细胞中纯化了DNA旋转酶B，DNA聚合酶α-原酶和单链DNA结合蛋白（RP-A），并且发现了DNA聚合酶α-蛋白酶α-蛋白酶的DNA旋转酶B和RP-A对DNA聚合酶α-蛋白酶的起源酶活性的影响，发现DNA聚合酶α-蛋白酶的活性被发现，并显着促进了Primans B的活性。此外，由于RP-A抑制的起酶活性是由DNA旋转酶B恢复的，因此揭示了DNA旋转酶B的作用类似于参与原核细胞和病毒中DNA复制的DNA解旋酶，并且从功能的角度来看，可以证明DNA Helicase B是DNA Helicase B中的DNA Helicase涉及DNA helicase涉及DNA涉及DNA涉及的DNA。 2。DNA解旋酶B纯化以确定氨基酸序列，并试图根据氨基酸序列克隆cDNA，并且可以将cDNA克隆到排除N末端的一部分时。