真核細胞の新規DNA修復系の検出と修復機構の解析

真核细胞新型DNA修复系统的检测及修复机制分析

基本信息

批准号：
07272209
负责人：
榎本武美
金额：
$ 3.2万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、色素性乾皮症(XP)C群の患者の細胞で、DNAヘリカーゼの一つが変化(変異ではない)しているのを見い出しこの遺伝子をクローニングし、大腸菌のRecQ蛋白ホモローグであることを明らかにした。そこで本研究では、真核細胞のRecQがDNA修復の過程でどのような役割を果たしているかを解析することを目的とした。ヒトおよび大腸菌のRecQの間で相同性の高い部分の塩基配列を利用して出芽酵母の相同遺伝子をクローニングした。得られた相同遺伝子は検索の結果、TPS1(topoisomerase poor growth suppressor)と同一のものであった。このTPS1遺伝子の破壊株を作製し、その性状を調べた。破壊株は、紫外線やX線には感受性を示さなかったが、MMSやEMS等のアルキルカ化剤に感受性になった。また、胞子形成能が野生株の1/8〜1/25に低下しており、減数分裂時の組み換えの頻度も約1/10に低下していた。ごく最近、ヒトの遺伝病ブルーム症候群の原因遺伝子(BLM)がクローニングされ、コードされる蛋白はRecQにホモロジーが高いことが示された。しかし、この遺伝子は我々がクローニングしたものと同じものではなく、ヒトには少なくとも二つのRecQホモローグがあることが明らかになった。酵母のTPS1は我々のクローニングしたヒトRecQよりBLMに近く、酵母の遺伝子破壊株の観察は酵母のBLM遺伝子の機能を解析したことになり、ブルーム症候群の患者の細胞はEMSに感受性であり、患者は不稔になるという報告と一致し、このRecQはブルーム症候群で欠陥のある修復過程に関与する蛋白であることが明らかになった。一方、今一つRecQの方も減数分裂時のDNA組み換えに関与する可能性を示唆する結果が得られた。

我们发现，在色素干燥皮肤（XP）C组中，DNA解旋酶之一在克隆该基因中变化（未突变），这是大肠杆菌的RECQ蛋白同源物。因此，在这项研究中，目的是分析核细胞在DNA恢复过程中起什么作用。种酵母的国土基因使用高同源部分的基本序列在人和大肠杆菌的Recq之间克隆。由于搜索，获得的相基因与TPS1（拓扑异构酶较差的抑制剂）相同。产生了TPS1基因破坏的菌株，并检查了其特性。破坏性菌株对紫外线或X砂没有敏感性，而是对MMS和EMS等烷基鲁卡化学物质敏感。此外，形成能力的孢子从1/8降低至1/25的野生菌株，而在降低时重组的频率降低到约1/10。最近，克隆了人类遗传病扫帚综合征的致病基因（BLM），表明编码的蛋白质在RECQ中具有很高的同源性。但是，该基因与克隆不同，并且已经揭示了人类至少具有两个RECQ同源物。酵母TPS1比我们的克隆人类REC更接近BLM，并且观察酵母菌遗传破坏的共享已经分析了酵母菌BLM基因的功能，而Bloom综合征患者的细胞对EMS敏感。进行了消毒，表明该RECQ是涉及Bloom综合征缺陷修复过程的蛋白质。另一方面，招募人员之一。