電気刺激後の脳に発現誘導される分泌性および膜結合性神経再生関連蛋白の探索

寻找电刺激后大脑中诱导表达的分泌型和膜结合型神经再生相关蛋白

基本信息

批准号：
09780722
负责人：
木下専
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

神経再生や可塑性に関与する分泌性ないし膜結合性蛋白の探索を目的として、電気刺激後のマウス脳由来のcDNAライブラリーをシグナルシークエンス・トラップ法によってスクリーニングした。これにより単離された既知遺伝子はBMP2 receptor,somatostatin receptor4,glycine receptor α1,L1,neuronatin-3,IGF-bindingprotein5等多数であった。一方、ESTのみに類似性を有する遺伝子は12クローン、データベース上の遺伝子と全く類似性のない遺伝子は16クローンであった。全長が単離できた未知遺伝子のうち、培養細胞に発現させると細胞接着抑制活性を有する分子量27.8kDのI型膜蛋白(eludin-1と仮称)をコードするものに集中して解析を進めた。1) ヒトのESTデータベースにcludin-1と類似した27.5kDのI型膜蛋白をコードするeludin-2を見出し、同様の抗細胞接着活性を有することを確認した。2) eludin-1-GFP融合蛋白も同等の活性を有し、細胞膜に集積することを確認した。3) eludin-1を高発現した線維芽細胞細胞においては接着斑の数が極端に減少していることを見出した。4) eludin-1の接着斑形成阻害・抗接着活性における、各種プロテインキナーゼ阻害剤の効果をスクリーニングした。このうちstaurosporinによって活性がブロックされることから、リン酸化・脱リン酸化による活性制御の可能性を見出した。5) eludin-1の抗細胞接着活性は、collagenないしfibronectinを基質にコーティングすることで拮抗されたことから、細胞外マトリックスとの相互作用が重要であることを確認した。

通过信号服务陷阱方法尖叫到电刺激后，源自小鼠大脑的cDNA文库，目的是寻找与可塑性有关的神经源性再生和可塑性。分离的基因是大量已知基因，其具有大量的BMP2受体，生长抑素受体4，甘氨酸受体α1，L1，Neuronatin-3，IGF-丁丁蛋白5。另一方面，仅具有相似性的基因是12个克隆，并且数据库上的基因完全没有相似性。在遗传总长度的未知基因中，分析集中在27.8 kd的分子量（暂定名称为eludin-1）的代码上，其分子量为27.8 kd，它们具有细胞粘附活性。 1）发现Eludin-2编码为27.5KD I型I-膜蛋白，类似于人类EST数据库中的Cludin-1，发现具有相同的抗细胞粘附活性。 2）Eludin-1-GFP融合蛋白也具有相同的活性，并被证实在细胞膜中积累。 3）发现在高度表达的Eludin-1的成纤维细胞细胞中，粘合剂斑点的数量极大地减少。 4）筛选出各种保护性激酶抑制剂的作用，在依然丁-1的粘附斑的形成抑制和抗粘附活性中。其中，活性被Staurausporin阻断，Staurausporin发现了由于磷酸化和磷酸化而导致活性控制的可能性。 5）可以证实，与外部细胞基质的相互作用很重要，因为通过将胶原蛋白或纤连蛋白作为底物涂抹抗蛋白-1的抗细胞粘附活性。